[發明專利]總蕓苔素含量的液相色譜測定方法

無效

• 申請號: 200910167704.7
• 申請日: 2009-09-22
• 公開（公告）號: CN101672831A
• 公開（公告）日: 2010-03-17
• 發明（設計）人: 蔣捷先
• 申請（專利權）人: 蔣捷先
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/28;G01N30/86
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

所屬技術領域

本發明涉及一種植物生長調節劑含量的液相色譜測定方法，尤其是蕓苔素的液相色譜測定方法，屬于色譜分析檢測技術領域。

背景技術

目前，蕓苔素類物是植物生長調節劑類物質，有促進植物細胞伸長、分裂、提高結實率和全面調節植物生長發育的作用。對糧、棉、油、麻、果、菜及食用菌有明顯的增產效果，目前國內外在農業生產中均已廣泛應用。天然蕓苔素類物由于其來源于自然，具有高效、無毒、無污染的優點，是今后綠色農藥的發展方向。

從天然物質中提取的蕓苔素是一類物質，目前國內外已發現并認可的天然蕓苔素已有近50多種，總稱為蕓苔素類物，時至今日，迫切需要一種能較準確地測定其總量的檢測方法，但由于目前尚不能準確測其總量，因而對商品的生產和應用帶來很大的盲目性，是不利的。

國內外有人報導了蕓苔素的測定方法，如：“高效液相色譜法測定22S，23S，23R表高油菜素內酯”；“高效液相色譜法測定檳榔花粉中的蕓苔素內酯”；“丙酰蕓苔素內酯的氣相色譜分析”：“Anal?ChimActa，1990；228(1)；101”；“AnalSci，1988；4(5)；533；CA，109；226035W”等。總結如下：他們都是將蕓苔素類物中的某一種物質，如：蕓苔素內酯(BR)、表蕓苔素內酯(ep-BR)、表高蕓苔素內酯(BR-120)、丙酰蕓苔素內酯、扁豆甾醇內酯、高扁豆甾醇內酯、栗甾酮等衍生化后，使用色譜法測定(氣相色譜或液相色譜)，使用的檢測器有：紫外檢測器、熒光檢測器、電化學檢測器等。在衍生化方面，使用下列衍生化試劑：1-氰基異吲哚-2-間-苯硼酸、9一菲硼酸、二甲氨基萘-5-磺酰硼酸、二茂鐵硼酸、萘硼酸和苯硼酸等，其方法的特點是：測定蕓苔素衍生化后生成的蕓苔素衍生物的量，來對該種蕓苔素定量。

另外，國內外目前應用的這類方法，對組分相對單一的產品，如：用合成方法生產的某一種蕓苔素原藥和產品或用提取方法得到的某一種蕓苔素的分析來說是適用的，方法準確，結果令人滿意，但只能測定該種蕓苔素的含量。對從天然物質中提取的蕓苔素類物來說，是不適用的，原因很簡單，從天然物質中提取的蕓苔素是多種蕓苔素的混合物，組分可能多達幾種到數十種，想用上述測定單一含量的方法來測定其總含量是不可能的，也是不現實和無操作性的，目前市面上還無所有上述各蕓苔素標準品的成品。

發明內容

為了克服現有蕓苔素類物中總蕓苔素含量不能準確測定的不足，本發明提供一種利用液相色譜測定蕓苔素類物衍生化后剩余的衍生化試劑的量，來對蕓苔素類物的總量進行定量的方法。

本發明解決此技術問題所采用的技術方案是：總蕓苔素含量的液相色譜測定方法，所用儀器、試劑、色譜條件、樣品處理、測定及計算步驟如下：

儀器：

高效液相色譜儀；手動進樣器；紫外-可見光檢測器；數據處理機；

試劑：

甲醇或乙腈；乙酸乙酯(A.R)；蕓苔素類物標準品；苯硼酸類物標準品；天然蕓苔素類物和制劑；

色譜條件：

色譜柱：6.0mm?I.d.×150mm不銹鋼柱，內裝填料；

流動相組成體積比：甲醇(乙腈)∶水＝60～90∶40～10；

流速：0.7～1ml/min；

檢測波長：UV222～270nm；

柱溫：室溫；

樣品處理：

(1)苯硼酸類物標準品溶液的配制：

準確稱取10.0mg苯硼酸類物標準品M1，用甲醇或乙酸乙酯溶解后，轉入25ml容量瓶中，用甲醇或乙酸乙酯定容為V1；

(2)蕓苔素類物標準品溶液的配制：

準確稱取15.0mg蕓苔素類物標準品M2，準確稱取10.0mg苯硼酸類物標準品M1，一并放入燒杯中，用甲醇或乙酸乙酯溶解后，轉入25ml容量瓶中，于80℃水浴反應0.5h，冷卻后，用甲醇或乙酸乙酯定容為V2；

(3)天然蕓苔素類物試樣溶液的配制：

固體試樣配制：準確稱取10.0mg苯硼酸類物標準品M1，按樣品∶苯硼酸類物＝1.0～2.0∶1的比例，準確稱取粉狀樣品M3，一并放入燒杯中，用甲醇或乙酸乙酯溶解后，轉入25ml容量瓶中，于80℃水浴反應0.5h，冷卻后，用甲醇或乙酸乙酯定容為V3；

液體試樣配制：準確吸取1.0～2.0ml液體樣品M3放入燒杯中，在80℃水浴中蒸發至干，然后準確稱取10.0mg苯硼酸類物標準品M1加入燒杯中，用甲醇或乙酸乙酯溶解后，轉入25ml容量瓶中，于80℃水浴反應0.5h，冷卻后，用甲醇或乙酸乙酯定容為V3；