[發明專利]總蕓苔素含量的液相色譜測定方法

無效

• 申請號: 200910167704.7
• 申請日: 2009-09-22
• 公開（公告）號: CN101672831A
• 公開（公告）日: 2010-03-17
• 發明（設計）人: 蔣捷先
• 申請（專利權）人: 蔣捷先
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/28;G01N30/86
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1、一種總蕓苔素含量的液相色譜測定方法，其特征在于，所用儀器、試劑、色譜條件、樣品處理、測定及計算步驟如下：

儀器：

高效液相色譜儀；手動進樣器；紫外-可見光檢測器；數據處理機；

試劑：

甲醇或乙腈；乙酸乙酯(A.R)；蕓苔素類物標準品；苯硼酸類物標準品；

天然蕓苔素類物和制劑；

色譜條件：

色譜柱：6.0mm?I.d.×150mm不銹鋼柱，內裝CLC-C₁₈填料；

流動相組成體積比：甲醇(乙腈)∶水＝6090∶40～10；

流速：0.7～1ml/min；

檢測波長：UV?222～270nm；

柱溫：室溫；

樣品處理：

(1)苯硼酸類物標準品溶液的配制：

準確稱取10.0mg苯硼酸類物標準品M1，用甲醇或乙酸乙酯溶解后，轉入25ml容量瓶中，用甲醇或乙酸乙酯定容為V1；

(2)蕓苔素類物標準品溶液的配制：

準確稱取15.0mg蕓苔素類物標準品M2，準確稱取10.0mg苯硼酸類物標準品M1，一并放入燒杯中，用甲醇或乙酸乙酯溶解后，轉入25ml容量瓶中，于80℃水浴反應0.5h，冷卻后，用甲醇或乙酸乙酯定容為V2；

(3)天然蕓苔素類物試樣溶液的配制：

固體試樣配制：準確稱取10.0mg苯硼酸類物標準品M1，按樣品∶苯硼酸類物＝1.0～2.0∶1的比例，準確稱取粉狀樣品M3，一并放入燒杯中，用甲醇或乙酸乙酯溶解后，轉入25ml容量瓶中，于80℃水浴反應0.5h，冷卻后，用甲醇或乙酸乙酯定容為V3；

液體試樣配制：準確吸取1.0～2.0ml液體樣品M3放入燒杯中，在80℃水浴中蒸發至干，然后準確稱取10.0mg苯硼酸類物標準品M1加入燒杯中，用甲醇或乙酸乙酯溶解后，轉入25ml容量瓶中，于80℃水浴反應0.5h，冷卻后，用甲醇或乙酸乙酯定容為V3；

苯硼酸類物峰面積與質量關系的確定；

(1)在色譜條件相同的情況下，準確吸取0.50ml苯硼酸類物標準品溶液V4，放入10ml容量瓶中，用甲醇或乙酸乙酯稀釋至刻度V5，搖勻，取10μl進樣V6，進行液相色譜測定，測出苯硼酸類物峰面積S1；

(2)與苯硼酸類物標準品質量M1相當的峰面積Z1為：

Z1=S1×V5×V1V6×V4=S1×10×2510×10-3×0.5=S1×50×103]]>

苯硼酸類物峰面積與蕓苔素類物標準品的質量關系：

(1)在色譜條件相同的情況下，準確吸取0.50ml蕓苔素類物標準品溶液V7，放入10ml容量瓶中，用甲醇或乙酸乙酯稀釋至刻度V8，并搖勻，取10μl進樣V9，進行液相色譜測定，測出剩余苯硼酸類物的峰面積S2；

(2)剩余的苯硼酸類物的總峰面積Z2為：

Z2=S2×V8×V2V9×V7=S2×10×2510×10-3×0.5=S2×50×103]]>

(3)蕓苔素類物標準品質量M2所消耗苯硼酸類物的總峰面積Z3為：

Z3＝Z1-Z2＝(S1-S2)×50×10³

(4)蕓苔素類物標準品質量M2與苯硼酸類物的峰面積的關系R1為：

R1=M2Z3=M2(S1-S2)×50×103=M2(S1-S2)×2×10-5]]>

苯硼酸類物峰面積與天然蕓苔素類物試樣溶液的質量關系：

(1)在色譜條件相同的情況下，準確吸取0.50ml天然蕓苔素類物試樣溶液V10，放入10ml容量瓶中，用甲醇或乙酸乙酯稀釋至刻度V11，搖勻，取10μl進樣V12，進行液相色譜測定，測出剩余苯硼酸類物的峰面積S3；

(2)天然蕓苔素類物試樣溶液剩余苯硼酸類物的總峰面積Z4為：

Z4=S3×V11×V3V12×V10=S3×10×2510×10-3×0.5=S3×50×103]]>

(3)天然蕓苔素類物試樣溶液中蕓苔素類物消耗苯硼酸類物的總峰面積Z5為：

Z5＝Z1-Z4＝(S1-S3)×50×10³

(4)天然蕓苔素類物試樣溶液中蕓苔素類物相當于蕓苔素類物標準品的質量A為：

A=R1×Z5=M2×2×10-5(S1-S2)×(S1-S3)×50×103=M2×(S1-S3)(S1-S2)]]>

天然蕓苔素類物試樣中總蕓苔素類物含量，按下式計算：

X=AM3=M2×(S1-S3)M3×(S1-S2)]]>

式中：

X-試樣中總蕓苔素類物含量，mg/g(固體樣)或mg/ml(液體樣)；

M2-蕓苔素類物標準品的質量，mg；

M3-天然蕓苔素類物試樣的質量，g(固體樣)或ml(液體樣)；

S1-苯硼酸類物標準品溶液測定中苯硼酸類物的峰面積；

S2-蕓苔素類物標準品溶液測定中剩余的苯硼酸類物的峰面積；

S3-天然蕓苔素類物試樣溶液測定中剩余的苯硼酸類物的峰面積。