[發明專利]恒河猴顳葉癲癇點燃模型及其藥物篩選方法

有效

• 申請號: 200910164207.1
• 申請日: 2009-08-20
• 公開（公告）號: CN101991569A
• 公開（公告）日: 2011-03-30
• 發明（設計）人: 周東;李宏霞;何俐;王莉;楊天華;洪楨;李勁梅;辜蕊;鄢波;張勤
• 申請（專利權）人: 四川大學華西醫院;成都華西海圻醫藥科技有限公司;國家成都中藥安全性評價中心
• 主分類號: A61K31/365
• 分類號: A61K31/365;A01K67/027;A61K49/00
• 代理公司: 北京律誠同業知識產權代理有限公司 11006
• 代理人: 李高峽

技術領域

本發明涉及恒河猴顳葉癲癇點燃模型，具體地，是用馬桑內酯在制備恒河猴顳葉癲癇點燃模型的藥物中的用途。

背景技術

癲癇是最常見的神經系統疾病之一，在我國發病率為35/10萬·年，患病率為5‰，其中難治性癲癇約占30％。反復癲癇發作不但給患者造成身心損害，而且長期服藥、社會歧視等同樣也使病人及其家屬背上沉重心理負擔。盡管近年來新型抗癲癇藥物不斷應用于臨床，但是從多項臨床試驗來看，除安全和副作用小外，它們并沒有為難治性癲癇患者的治療帶來明顯改觀，只有約5％的難治性癲癇患者通過新型抗癲癇藥物治療獲得緩解。而成人中常見的顳葉癲癇的預后是各種癲癇類型中最差的，約60-70％的患者為難治性癲癇。因此難治性癲癇尤其是顳葉難治性癲癇的基礎研究和臨床治療是目前世界神經病學界研究的一個熱點。難治性癲癇病因和發病機制復雜，發作無預見性，發作程度難以控制，目前主要通過建立難治性癲癇動物模型探討其發病機理、耐藥機制以及篩選鑒定新的抗癲癇藥。Loscher(Loscher?W.Animal?models?of?intractable?epilepsy.Prog?Neurobiol。1997，53：239-258.)提出耐藥性癲癇模型應具備以下特點：(1)發作類型與臨床耐藥性癲癇的發作類型相似；(2)模型具有腦部的陣發性異常放電，并可以從電生理方面評價藥物療效；(3)AED不能滿意控制其發作；(4)模型動物能存活較長時間。國際上唯一被認可的耐藥性癲癇模型是由Loscher等建立的大鼠耐苯妥英鈉杏仁核電點燃模型，但是該模型的缺點是：操作復雜，動物不易飼養，點燃率低，容易死亡，耐藥譜窄，對大鼠腦組織有機械損傷。

癲癇動物模型是癲癇發病機制和治療研究的重要手段之一。點燃癲癇模型是目前應用最廣泛的癲癇模型，其發病機制被認為與人類癲癇的發病機制相似。目前常用的主要是化學致癇劑匹羅卡品、紅藻氨酸和戊四唑等點燃的嚙齒類動物模型，還有電刺激腦內敏感部位如杏仁核點燃的動物模型和經雙側角膜反復電刺激(角膜點燃)點燃的模型等，其中有些模型被認為是難治性癲癇模型，但是它們對標準抗癲癇藥物耐藥發生率低，而且存在對藥物反應不穩定的現象，因此極大的限制了這些模型在難治性癲癇研究中的應用。通過肌肉局部注射一種新化學致癇劑馬桑內酯的方法，建立并證實了馬桑內酯點燃大鼠癲癇模型為耐藥性模型，腦電圖顯示為顳葉癲癇，免疫組化法顯示點燃模型腦血管內皮細胞和血腦屏障周圍星形膠質細胞P-gp蛋白表達明顯高于對照組。該顳葉癲癇模型優點是建立容易，點燃率高，而且對標準抗癲癇藥物卡馬西平，苯妥英鈉，丙戊酸鈉耐藥。這是國內外第一個該致癇劑點燃的耐藥顳葉癲癇動物模型，文章已于2003年在Epilepsi雜志發表。因為嚙齒類動物與人類的種屬差異較大，僅從嚙齒類動物的研究來推論人類癲癇的生理和病理生理過程，極易出現偏移和誤導。另一方面大鼠腦容量小，組織檢查取材困難，行為學觀察及腦電圖操作難度大，不利于進一步深入研究。恒河猴屬靈長類動物，在解剖、生理機能及生化代謝等方面與人類相似，是了解人類生理和病理生理知識的較為理想的實驗動物。而目前對靈長類動物癲癇模型研究較少，國內尚未有報道，國外也主要局限在腦內局部注射致癇劑如氧化鋁凝膠、荷包牡丹堿等和電刺激杏仁核、扣帶回等點燃模型。

發明內容

本發明的技術方案是提供了一種恒河猴顳葉癲癇模型。本發明的另一技術方案是提供了該動物模型的制備方法和用途。

本發明提供了一種恒河猴顳葉癲癇點燃模型，它是將閾下致癇劑量為0.5ml/kg的馬桑內酯施于恒河猴制備而成的動物模型，其中，每1ml馬桑內酯注射劑相當于6.7g生藥材馬桑葉。

其中，所述的馬桑內酯的用法為：臀部肌肉注射馬桑內酯，間隔72小時注射一次，共注射48至60次，在模型點燃后改為每隔7天重復注射一次，以維持點燃效果。

其中，所述的顳葉癲癇點燃模型是癲癇耐藥動物模型。

本發明還提供了一種制備恒河猴顳葉癲癇模型的方法，將劑量為0.5ml/kg的馬桑內酯施用于恒河猴，其中，每1ml馬桑內酯注射劑相當于6.7g生藥材馬桑葉。

其中，所述的馬桑內酯的用法為：臀部肌肉注射馬桑內酯，間隔72小時注射一次，共注射48至60次，在模型點燃后改為每隔7天重復注射一次，以維持點燃效果。

本發明還提供了所述的動物模型在篩選治療顳葉癲癇的藥物中用途。

其中，所述的動物模型是癲癇耐藥動物模型。

本發明還提供了一種篩選治療顳葉癲癇的藥物的方法，它包括如下步驟：

a、用馬桑內酯建立顳葉癲癇動物模型；