[發(fā)明專(zhuān)利]一株高生物量富鋅酵母及其選育方法和應(yīng)用

無(wú)效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 200910163867.8
• 申請(qǐng)日: 2009-08-07
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN101629146A
• 公開(kāi)（公告）日: 2010-01-20
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 胡振英;程富勝;辛蕊華;羅永江;羅超應(yīng);鄭繼芳;李建喜
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院蘭州畜牧與獸藥研究所
• 主分類(lèi)號(hào): C12N1/18
• 分類(lèi)號(hào): C12N1/18;C12N15/01;C12N13/00;A23L1/28;A23L1/304;A23K1/00;A23K1/16;A61K36/064;A61P3/02;C12R1/865
• 代理公司: 蘭州振華專(zhuān)利代理有限責(zé)任公司
• 代理人: 張 晉

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種微生物的品種，這種微生物的選育方法及其應(yīng)用，確切講本發(fā)明涉及的微生物是一種高生物量富鋅酵母。

背景技術(shù)

近年來(lái)，已有一些稱(chēng)為“富鋅酵母”的產(chǎn)品問(wèn)世，如李文珍等以啤酒酵母(Sacchsromyces?cerevisiae)為出發(fā)菌種，利用玉米糖化渡加入適當(dāng)?shù)臓I(yíng)養(yǎng)元素及鋅離子，經(jīng)發(fā)酵試驗(yàn)獲得產(chǎn)品，微生物學(xué)雜志?1994年?第14卷?1期；胡振英等將啤酒酵母菌株在高鋅條件下進(jìn)行50代的適應(yīng)性培養(yǎng)，獲得了富鋅酵母菌株，中獸醫(yī)醫(yī)藥雜志?1997年第6期；陳佩林：以酵母菌IFO2346菌株為菌種，培養(yǎng)基中加入適量的鋅離子，經(jīng)發(fā)酵試驗(yàn)獲得高鋅酵母產(chǎn)品，動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展2003，24(3)62-64；郭雪娜等對(duì)不同種屬的酵母菌株運(yùn)用了雜交育種技術(shù)，出篩、復(fù)篩、單倍體分離、亞硝基胍(NTG)誘變，選育到一株富鋅酵母菌株(編號(hào)為ZGH.374，微生物學(xué)報(bào)?2004年4月?44卷2期。

中國(guó)發(fā)明專(zhuān)利申請(qǐng)93119253.6公開(kāi)了一種藥用富鋅酵母、生產(chǎn)工藝及其制品，它采用在菌株培養(yǎng)過(guò)程選用含鋅量高的啤酒酵母菌株，在種子罐或者商品罐接種培養(yǎng)過(guò)程，分別在培養(yǎng)基中添加硫酸鋅，經(jīng)相應(yīng)的工藝過(guò)程，獲得富鋅酵母；富鋅酵母和配料，經(jīng)過(guò)藥用顆粒劑或藥用片劑的生產(chǎn)工藝制成藥用富鋅酵母制品。

中國(guó)發(fā)明專(zhuān)利03119428.1公開(kāi)了一株富鋅酵母及其選育方法與應(yīng)用，本發(fā)明提供的菌株為高生物量富鋅酵母(Saccharomyces?cerevisiae)ZGFH-94?CGMCC№0896。其選育方法包括：1)分別篩選生物量高的酵母菌種和抗鋅能力強(qiáng)及細(xì)胞含鋅量高的酵母菌種；2)篩選生物量高的酵母菌種和抗鋅能力強(qiáng)及細(xì)胞含鋅量高的酵母菌種的單倍體突變菌株；3)生物量高的酵母菌單倍體突變菌株與抗鋅能力強(qiáng)及細(xì)胞含鋅量高的酵母菌單倍體突變菌株進(jìn)行原生質(zhì)體融合；4)在選擇培養(yǎng)基上篩選高生物量和高含鋅量的融合二倍體優(yōu)良菌株，即富鋅酵母菌種。

但這些產(chǎn)品存在明顯的缺陷和不足：國(guó)內(nèi)外有關(guān)富鋅酵母的研究主要側(cè)重于酵母細(xì)胞對(duì)鋅離子的傳遞和調(diào)控或?qū)N進(jìn)行亞硝基胍(NTG)、鈷60、紫外等方法誘變，其主要缺陷在于：不同酵母菌種對(duì)鋅的抗性能力有較大差異，從而對(duì)鋅離子的吸收轉(zhuǎn)化能力差異較大；而且其酵母細(xì)胞內(nèi)的鋅含量較低，產(chǎn)品缺乏穩(wěn)定性，不利于工業(yè)化生產(chǎn)，參見(jiàn)孔林等，食品與生物技術(shù)學(xué)報(bào)?2006年11月?第25卷?第6期。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明提供一株高生物量的含鋅量高的酵母菌株，同時(shí)本發(fā)明提供這種酵母的選育方法、培養(yǎng)方法及其用途。

本發(fā)明提供的高生物量富鋅酵母菌株(Saccharomyces?cerevisiae)F-090428X。該菌株于2009年07月02日保藏于中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心(簡(jiǎn)稱(chēng)CGMCC)，保藏號(hào)為CGMCC?No.3156。

本發(fā)明的高生物量的富鋅酵母菌株的選育方法是以在2000μg/l～10000μg/l鋅離子濃度的的麥芽汁固體培養(yǎng)基中馴化的啤酒酵母菌中篩選出生物量高、耐鋅能力強(qiáng)及細(xì)胞含鋅量高的酵母菌種作為誘變出發(fā)菌株，取一接種環(huán)的發(fā)菌株接入盛有30ml液體培養(yǎng)基制備成菌懸液，在29℃，搖床振搖24h，再取2ml菌液轉(zhuǎn)入盛有18ml帶玻珠的無(wú)菌生理鹽水中，再將菌懸液用不高于900W的微波輻照，照射時(shí)間不大于65分鐘，將經(jīng)微波輻照的酵母鋅菌懸液涂在硫酸鋅濃度不高于15000μg/ml的麥芽汁固體培養(yǎng)基平板，經(jīng)過(guò)多次復(fù)篩和傳代試驗(yàn)，得到所要的高生物量的富鋅酵母菌株，以上所用的麥芽汁固體培養(yǎng)基為8Bx麥芽汁、容積重量比為0.3％的尿素和1.2％瓊脂、pH5.0，所用的液體培養(yǎng)基為8Bx麥芽汁、容積重量比為0.3％的尿素、pH5.0。

本發(fā)明的高生物量的富鋅酵母菌株的選育中所用的微波頻率為2450MHz。

本發(fā)明的高生物量的富鋅酵母菌株的培養(yǎng)條件是在麥芽汁培養(yǎng)基上接種高生物量富鋅酵母(Saccharomyces?cerevisiae)F-090428X，接種量為體積比10％-30％，在28℃～30℃攪拌培養(yǎng)16～48小時(shí)，所用的培養(yǎng)基為8Bx麥芽汁、容積重量比為0.3％的尿素的麥芽汁-尿素培養(yǎng)基，總糖含量為5％～20％，培養(yǎng)基中鋅鹽濃度為10000～15000μg/ml，培養(yǎng)基的pH為4.5～5.5。

本發(fā)明的高生物量的富鋅酵母菌株在制備人類(lèi)高含鋅食品或高含鋅食品添加劑或高含鋅藥物中的應(yīng)用。

本發(fā)明的高生物量的富鋅酵母菌株在制備動(dòng)物高含鋅飼料或高含鋅飼料添加劑中的應(yīng)用。