[發(fā)明專利]一種β-葡聚糖酶的生產(chǎn)方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 200910163452.0
• 申請日: 2009-08-15
• 公開（公告）號: CN101993865A
• 公開（公告）日: 2011-03-30
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 孫維國;李統(tǒng)鋒;顧克才;丁少明
• 申請（專利權(quán)）人: 白銀賽諾生物科技有限公司
• 主分類號: C12N9/42
• 分類號: C12N9/42;C12N9/24;C12R1/885
• 代理公司: 甘肅省知識產(chǎn)權(quán)事務(wù)中心 62100
• 代理人: 劉繼春

1.一種β-葡聚糖酶的生產(chǎn)方法，利用李氏木霉作為菌種，以微晶纖維素、玉米漿、磷酸二氫鉀、硫酸銨和碳酸鈣為原料，進(jìn)行液體深層發(fā)酵生產(chǎn)β-葡聚糖酶，發(fā)酵濾液經(jīng)板框過濾，得到濾渣與β-葡聚糖酶液；所得β-葡聚糖酶液再經(jīng)過超濾濃縮和噴霧干燥后得粉狀β-葡聚糖酶產(chǎn)品；其特征在于所得濾渣全部用于替代微晶纖維素作為主原料，重新進(jìn)行液體深層發(fā)酵生產(chǎn)β-葡聚糖酶；循環(huán)反復(fù)，對濾渣重復(fù)利用；包括下述步驟：

A、菌種制備與擴(kuò)大培養(yǎng)

A.1將李氏木霉試管斜面菌種在無菌條件下轉(zhuǎn)入已制備好的以PDA為培養(yǎng)基的500ml茄瓶中，pH5.0～5.8；滅菌條件：121℃保溫30分鐘；28℃～30℃培養(yǎng)5～7天備用；

A.2用6立方米種子罐對菌種擴(kuò)大培養(yǎng)

將工業(yè)級的微晶纖維素58～62kg、玉米漿73～78kg、磷酸二氫鉀17～19kg和硫酸銨14.5～15.5kg分別投入6立方米種子罐內(nèi)，用自來水定容到2.8～3.2立方米；攪拌均勻；然后用蒸汽直接滅菌，120～121℃保溫30～33分鐘，再降溫到30～32℃；接入按步驟A.1所得的6瓶500ml茄瓶的李氏木霉菌種；在風(fēng)量為1∶0.6、溫度為30℃～32℃，罐壓力為0.06～0.08Mpa條件下培養(yǎng)32～36小時，得擴(kuò)大培養(yǎng)的李氏木霉菌種備用；

B、用60立方米發(fā)酵罐發(fā)酵生產(chǎn)β-葡聚糖酶

B.1將工業(yè)級的微晶纖維素2300～2450kg、玉米漿950～1050kg、磷酸二氫鉀230～250kg、硫酸銨190～210kg與碳酸鈣19～21kg分別投入60立方米發(fā)酵罐內(nèi)，用自來水定容到39～42立方米；攪拌均勻，PH4.0；然后用蒸汽直接滅菌，113～115℃保溫30～33分鐘，再降溫到29～31℃；將步驟A.2所得擴(kuò)大培養(yǎng)的李氏木霉菌種全部接入；在風(fēng)量為1∶0.17～0.18、溫度為27℃～29℃，罐壓力為0.06～0.08Mpa條件下培養(yǎng)138～148小時，得發(fā)酵液；利用板框過濾機(jī)將發(fā)酵液進(jìn)行固液分離，得一次濾渣與β-葡聚糖酶清液；

B.2將步驟B.1所得的含水量為42～50％的全部一次濾渣，玉米漿880～930kg，磷酸二氫鉀190～210kg，硫酸銨152～168kg與碳酸鈣15.5～16.5kg分別投入60立方米發(fā)酵罐內(nèi)，用自來水定容到39～42立方米；攪拌均勻，PH4.0，然后用蒸汽直接滅菌，113～115℃保溫30～33分鐘，再降溫到29～31℃，接入按步驟A.2制備的另一罐6立方米種子罐擴(kuò)大培養(yǎng)的李氏木霉菌種，在風(fēng)量為1∶0.17～0.18、溫度為27℃～29℃，罐壓力為0.06～0.08Mpa條件下培養(yǎng)138～148小時，得發(fā)酵液；利用板框過濾機(jī)將發(fā)酵液進(jìn)行固液分離，得二次濾渣與β-葡聚糖酶清液；

C、β-葡聚糖酶的提純

將步驟B.1或B.2所得β-葡聚糖酶清液采用分子量為10000道爾頓的超濾膜進(jìn)行濃縮至9～11倍；然后采用壓力式噴霧塔噴霧干燥；工藝條件：進(jìn)口溫度125～135℃，出口溫度55～60℃，干燥所得即為粉狀β-葡聚糖酶產(chǎn)品；

D、β-葡聚糖酶的檢測

酶活力單位定義：在測定條件下，每小時水解β-葡聚糖產(chǎn)生1mg還原糖所需酶量定義為一個酶活力單位u；

酶活力檢測方法：采用DNS法。

2.如權(quán)利要求1所述的一種β-葡聚糖酶的生產(chǎn)方法，其特征在于步驟B.2的后面還包括步驟：

B.3將步驟B.2所得的含水量為42～50％的全部二次濾渣，玉米漿840～920kg，磷酸二氫鉀152～168kg，硫酸銨133～147kg，碳酸鈣15.5～16.5kg分別投入60立方米發(fā)酵罐內(nèi)，用自來水定容到39～42立方米；攪拌均勻，其它工藝條件按步驟B.2，得三次濾渣與β-葡聚糖酶清液。

3.如權(quán)利要求2所述的一種β-葡聚糖酶的生產(chǎn)方法，其特征在于步驟B.3的后面還包括步驟：

B.4將步驟B.3所得的含水量為42～50％的全部三次濾渣，玉米漿820～900kg，磷酸二氫鉀133～147kg，硫酸銨114～126kg，碳酸鈣13.5～14.5k?kg分別投入60立方米發(fā)酵罐內(nèi)，用自來水定容到39～42立方米；攪拌均勻，其它工藝條件按步驟B.2，得四次濾渣與β-葡聚糖酶清液。