[發(fā)明專利]一種以蛋白酶作為煙草加工輔助的酶制劑及制備、使用方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 200910163271.8
• 申請日: 2009-12-30
• 公開（公告）號: CN101787362A
• 公開（公告）日: 2010-07-28
• 發(fā)明（設計）人: 韓偉;何寶玉;陳應昆
• 申請（專利權）人: 云南萬芳生物技術有限公司
• 主分類號: C12N9/50
• 分類號: C12N9/50;A24B15/20
• 代理公司: 昆明科陽知識產(chǎn)權代理事務所 53111
• 代理人: 孫山明

技術領域

本發(fā)明屬于煙草復烤前添加的提高煙草品級的酶制劑。

背景技術

蛋白酶作為蛋白質(zhì)的水解酶，種類繁多，不同蛋白酶的性質(zhì)和催化反應條件 不同。姚光明研究了中性蛋白酶、木瓜蛋白酶和堿性蛋白酶對煙草中蛋白質(zhì)的降 解。得出：①加蛋白酶后的烤煙煙葉，在一定溫度下經(jīng)過一定時間貯存煙葉中的 蛋白質(zhì)含量均有所降低；②3種蛋白酶對烤煙煙葉中蛋白質(zhì)降解的效果并不相同， 以中性蛋白酶降解的幅度最大，木瓜蛋白酶次之，堿性蛋白酶的降解幅度最小， ③在河南B₃F烤煙煙葉中，中性蛋白酶、木瓜蛋白酶、堿性蛋白酶的用量分別為 120u/g、40u/g和80u/g時，煙葉中蛋白質(zhì)的變化量最大；④中性蛋白酶的用量為 120u/g，在45℃煙葉水分為25％、作用時間為4h的條件下，可降解煙葉中蛋白 質(zhì)12％左右；煙葉的燃吸質(zhì)量得到明顯改善。分別取河南B3F、山東X3F、貴州 B3K烤煙和湖北中三白肋煙加人中性蛋白酶，作用時間結束后，制成卷煙樣品送 鄭州煙草研究院進行評吸。評吸結果表明：用中性蛋白酶處理過的煙葉香氣質(zhì)變 好，香氣量有所增大，雜氣減輕，刺激性減小，余味變得較干凈舒適，尤其是對 白肋煙雜氣的去除和苦辣味的消除效果更為明顯。[姚光明。降低煙葉中蛋白質(zhì) 含量的研究。煙草科技，2000，(9)：6～8]。

工業(yè)化生產(chǎn)具有充足酶來源的蛋白酶，主要以福林-酚法測定。一般可用酶 反應的最佳酶活顯示的最佳pH值范圍簡單地劃分為酸性、中性或堿性蛋白酶， pH6～9的一般可歸在中性蛋白酶類，常見的有枯草孢桿菌As1.398產(chǎn)生的蛋白 酶pH5.5～9.5，測定標準中采用pH7.5，還有來源動植物組織pH8.0左右的胰蛋 白酶和pH7的木瓜蛋白酶等[郭勇主編。酶工程。北京：中國輕工業(yè)出版社，1994， p314～317；楊葉昆，等。酪蛋白的酶促水解及其水解物的美拉德反應。食品科 學，2003，24(4)：104～107]。由蛋白酶測定原理可知，福林(Folin)試劑(磷 鎢酸和磷鉬酸的混合物)，在堿性條件下極不穩(wěn)定，可被酚類化合物還原呈蘭色 反應(鎢蘭和鉬蘭混合物)。蛋白質(zhì)及水解產(chǎn)物含酚基酪氨基酸、色氨酸和苯丙 氨酸也有此反應。這些有酚基的氨基酸及其蛋白酶產(chǎn)物氨基酸是Maillard反應前 體，Maillard反應產(chǎn)物的加香效果有①在適宜條件下，谷氨酸、半胱氨酸與葡萄 糖生成的Maillard反應產(chǎn)物對煙絲的吸味有一定程度的改進和修飾作用，表現(xiàn)為 減輕煙氣的刺激性和雜氣；②在其它條件相同的情況下，在反應原料里添加少量 乙醛可使Maillard反應產(chǎn)物的加香效果增強，煙香增濃，雜氣減輕；③以水代替 多元醇作為反應溶劑，得到的Maillard反應產(chǎn)物雖然也有增香作用，但留香時間 較短；④在相同反應條件下，谷氨酸與葡萄糖、蔗糖和木糖的反應產(chǎn)物加香效果 各不相同，其中以與葡萄糖的反應產(chǎn)物對卷煙吸味的改善效果最好；⑤在相同反 應條件下，葡萄糖與甘氨酸、丙氨酸、賴氨酸、谷氨酸和半胱氨酸的反應產(chǎn)物的 增香效果亦不同，以與谷氨酸的反應產(chǎn)物的增香效果最好，可以明顯改善低檔卷 煙的吸味[劉國珍，等。谷氨酸和葡萄糖的Maillard反應。煙草科技，2002，(10)： 30～33]。楊葉昆等，以胰蛋白酶和木瓜蛋白酶水解酪蛋白，水解產(chǎn)物和糖在一 定條件下進行美拉德反應制成新型非酶棕色化香料，具有濃郁的烤土豆香味。可 應用于食品和煙草的加香[楊葉昆，等。酪蛋白的酶促水解及其水解物的美拉德 反應。食品科學，2003，24(4)：104～107]。姚光明認為煙葉中蛋白質(zhì)含量過高， 燃吸時會產(chǎn)生如同燃燒羽毛的臭味，同時還會產(chǎn)生辛辣、苦澀的感覺。但是，煙 葉中蛋白質(zhì)的水解和進一步轉化的產(chǎn)物又可以產(chǎn)生煙草的致香物質(zhì)。因此，探索 使煙葉中部分蛋白質(zhì)酶解為一系列較小分子的含氮化合物，就可以有效地改善煙 葉的燃吸質(zhì)量，提高煙葉的使用價值[姚光明。降低煙葉中蛋白質(zhì)含量的研究。 煙草科技，2000，(9)：6～8]。

相關的專利文獻中，“一種促進打葉復烤煙葉自然醇化的生物酶處理方法” [中國發(fā)明專利ZL?02116594.7]，利用蛋白酶、果膠酶等生物酶來處理煙草，以降 解煙草中的蛋白質(zhì)和果膠，并配以生化反應促進劑丙酮酸、色氨酸、亮氨酸及金 屬離子Mn²⁺、Zn²⁺、Mg²⁺、K⁺來激活煙葉自身酶類活性。該發(fā)明所涉及的酶是 多種水解酶混合的復合酶，且有非酶成份添加物。

發(fā)明內(nèi)容