[發明專利]一種以蛋白酶作為煙草加工輔助的酶制劑及制備、使用方法

有效

• 申請號: 200910163271.8
• 申請日: 2009-12-30
• 公開（公告）號: CN101787362A
• 公開（公告）日: 2010-07-28
• 發明（設計）人: 韓偉;何寶玉;陳應昆
• 申請（專利權）人: 云南萬芳生物技術有限公司
• 主分類號: C12N9/50
• 分類號: C12N9/50;A24B15/20
• 代理公司: 昆明科陽知識產權代理事務所 53111
• 代理人: 孫山明

1.一種制備以蛋白酶作為煙草加工輔助的酶制劑的方法，該制劑的蛋白酶為pH5.5～9.5枯草芽孢桿菌As1.398發酵生產的中性蛋白酶，酶活力為36000U/mL，其特征是該酶制劑的制備方法包括以下步驟：

（1）將以上微生物來源的中性蛋白酶作為粗品進行精制，即，將蛋白酶粗制品固體以緩沖液溶解，二者比例（W/V）為1g︰10～20mL，3500r/min離心20min，取上清液，加入(NH₄)₂SO₄使其在上清液中的終濃度為42％，靜置12h后，4℃?15000r/min離心30min，取上清液，補加濃度（W/V）為10%的(NH₄)₂SO₄過夜，再一次4℃?15000r/min離心30min，收集沉淀，將第二次離心后的沉淀與第三次離心后的沉淀合并；?

（2）EDTA使蛋白酶酶活性呈可逆的鈍化，即，將⑴合并的沉淀用步驟（1）所述的緩沖液用量的一半充分溶解后，加入含0.1%?EDTA步驟（1）所述的緩沖液，補體積至步驟（1）所述的緩沖液體積，靜置2h，離心，得到酶活性被鈍化的上清液；?

（3）在獲得的上清液中加入濃度0.01%的蔗糖低聚物，上清液與蔗糖低聚物體積比為100?mL︰1?mL，經-8℃冷凍干燥濃縮8～10倍得濃縮酶制劑。