[發明專利]戶塵螨變應原診斷試劑及其制備方法

有效

• 申請號: 200910163045.X
• 申請日: 2009-08-21
• 公開（公告）號: CN101628119A
• 公開（公告）日: 2010-01-20
• 發明（設計）人: 牛占坡;王寧;喬秉善;李冬凌;湯承祁;任雅麗;裴瀟竹;張紅玉;單金鵬;王玉玲
• 申請（專利權）人: 北京新華聯協和藥業有限責任公司
• 主分類號: A61K49/00
• 分類號: A61K49/00;G01N21/31;G01N27/447;G01N33/577;G01N21/64
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• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明屬于生物技術領域，具體涉及一種通過致敏法來診斷戶塵螨過敏性疾病的變應原診斷試劑及其制備方法。?

背景技術

過敏性疾病是當今世界上最常見、最頑固的疾患之一，涉及臨床各科。速發型過敏反應是一種常見的過敏反應，主要為呼吸道過敏反應、消化道過敏反應、皮膚過敏反應以及過敏性休克。病癥主要表現為過敏性鼻炎、過敏性哮喘、過敏性腸胃炎以及濕疹、蕁麻疹等過敏性皮膚病。?

變態反應性疾病被世界衛生組織(WHO)認為是當前世界性的重大衛生學問題，世界各國變態反應性疾病的總發病率約為10～20％，包括過敏性哮喘、過敏性鼻炎、過敏性皮炎及過敏性眼結膜炎等，是臨床常見病、多發病。當前，變態反應疾病日趨嚴重，引起過敏的主要變應原有塵螨、花粉、屋塵、霉菌、羽毛等，而塵螨是世界性分布最強烈的變應原之一。它主要引起過敏性哮喘、過敏性鼻炎、過敏性皮炎等；塵螨性哮喘的發病被認為是速發型變態反應代表疾病。?

目前對戶塵螨的培養，國內外都有研究。國外已經有建立起戶塵螨培養體系的報道，而ALLERGON公司也專門培養并且出售螨系列的原材料。但是培養基的選擇是一個很重要的問題，有酵母粉、魚粉、肝粉、人皮屑、豬肉、動物飼料等其中若干種混合使用，培養周期至少三個月，而且飼料成分里含有的動物蛋白或其他本身能夠引起人的二次過敏，潛在的危險性很高。所以雖然有多家單位能夠大量培養戶塵螨，但是真正的不含其它動物蛋白的戶塵螨變應原顯有報道。?

過敏性疾病的治療首先需要診斷，而診斷試劑在目前市場上是一個空缺，一種很準確、有效的診斷試劑是至關重要的，同時這也就要求診斷試劑的專一特異性非常強，能引起二次過敏的成分不能存在。目前國內沒有戶塵螨純螨體變應原制成的變應原診斷試劑，而國外少有的幾家公司的產品也大部分是全螨體診斷試劑。?

發明內容

本發明目的之一是提供一種診斷過敏性疾病(支氣管哮喘、過敏性鼻炎等)的診斷試劑，即戶塵螨(Der?p)變應原及其診斷試劑。該診斷試劑利用致敏原理，使病人受試部位皮膚產生風團及紅暈反應，從而達到測定患者是否對某種物質過敏而引發疾病的目的。本發明戶塵螨(Der?p)變應原及其診斷試劑適于診斷速發型過敏性疾病。?

本發明過敏性疾病診斷試劑中的螨是指戶塵螨(Dermatophagoidespterronyssinus)，戶塵螨屬于節肢動物門、蛛形綱、無氣門目、麥食螨科、塵螨屬中的一種。體型橢圓，腹背較扁。雄螨大小為240～280×155～220微米，具前背板及后背板，后背板長大于寬，前緣達第2對背毛之前；足I和足II等粗，足I基節內突不相連，無胸骨。雌螨大小為290～380×220～260微米，有前背板，后體背中央皮紋縱行；各足分5節，足III粗長，足IV短小；交合囊小，受精囊花瓣狀。?

本發明另一目的是提供了戶塵螨純螨體變應原原材料的制備方法。?

本發明的再一目的是提供了戶塵螨變應原點刺液效價的評定方法，包括總蛋白含量的測定、主要致敏蛋白的定性定量分析以及戶塵螨變應原點刺液的免疫活性測定方法；從而達到戶塵螨變應原點刺液標準化的目的。?

本發明公開的戶塵螨變應原及其診斷試劑是通過下述技術方案來獲得：?

戶塵螨純螨體變應原原材料一般可通過螨種收集、分離鑒定、螨種培養、接種、培養、收獲、純化等步驟制備。?

1)螨種收集：廣泛收集起居室床上、枕頭、被褥、沙發、地毯等中的?粉塵以及房舍灰塵。?

2)分離鑒定：把收集到的粉塵過2號分樣篩，篩除雜質，再過4號分樣篩，將剩余粉塵平鋪于培養皿中，用蓋玻片撫平表面，避光置于陰涼潮濕的地點2～4小時，每半小時觀察一次。發現粉塵中有塵螨活動產生的凸起，即用接種針挑起少許凸起處粉塵，制片，對塵螨進行形態學鑒定，確認粉塵中塵螨種類后，于顯微鏡下將戶塵螨分離出來，用于菌種培養。?

3)菌種培養：取250ml無菌細胞培養瓶，每個培養瓶以無菌操作接入4藥匙(約3～7克)培養基，培養基為：蛋白粉23.7％、復合維生素0.2％、礦物質4.7％，其余為全麥粉，經過鈷60照射滅菌處理。然后接入半藥匙(約0.2～0.6克)上述已分離鑒定好的戶塵螨，置于溫度25℃，濕度75％～80％，避光條件下培養，至戶塵螨達到50％左右作為工作螨種。戶塵螨工作螨種于25℃、75％～80％條件下避光保存，每3～4個月傳代一次；或者挑取取戶塵螨占培養基總量的50％以上的培養瓶留作螨種，將培養瓶置于2～8℃、30％～60％濕度條件下保存，每月傳代一次。?