[發明專利]戶塵螨變應原診斷試劑及其制備方法

有效

• 申請號: 200910163045.X
• 申請日: 2009-08-21
• 公開（公告）號: CN101628119A
• 公開（公告）日: 2010-01-20
• 發明（設計）人: 牛占坡;王寧;喬秉善;李冬凌;湯承祁;任雅麗;裴瀟竹;張紅玉;單金鵬;王玉玲
• 申請（專利權）人: 北京新華聯協和藥業有限責任公司
• 主分類號: A61K49/00
• 分類號: A61K49/00;G01N21/31;G01N27/447;G01N33/577;G01N21/64
• 代理公司: 暫無信息
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1.戶塵螨純螨體變應原原材料的制備方法，其特征在于，采用下述步驟制備：

1)螨種收集：廣泛收集起居室床上、枕頭、被褥、沙發或地毯中的粉塵 以及房舍灰塵；

2)分離鑒定：把收集到的粉塵過2號分樣篩，篩除雜質，再過4號分樣 篩，將剩余粉塵平鋪于培養皿中，用蓋玻片撫平表面，避光置于陰涼潮濕的 地點2～4小時，每半小時觀察一次；發現粉塵中有塵螨活動產生的凸起， 即用接種針挑起少許凸起處粉塵，制片，對塵螨進行形態學鑒定，確認粉塵 中塵螨種類后，于顯微鏡下將戶塵螨分離出來，用于菌種培養；

3)菌種培養：取250ml無菌細胞培養瓶，每個培養瓶以無菌操作接入3～ 7克培養基，培養基為：蛋白粉23.7％、復合維生素0.2％、礦物質4.7％，其 余為全麥粉，經過鈷60照射滅菌處理；然后接入0.2～0.6克上述已分離鑒 定好的戶塵螨，置于溫度25℃，濕度75％～80％，避光條件下培養，至戶塵 螨達到50％作為工作螨種；戶塵螨工作螨種于25℃、濕度75％～80％條件下 避光保存，每3～4個月傳代一次；或者挑取取戶塵螨占培養基總量的50％ 以上的培養瓶留作螨種，將培養瓶置于2～8℃、30％～60％濕度條件下保存， 每月傳代一次；

4)接種：取250ml無菌細胞培養瓶，每個培養瓶以無菌操作接入3～7克 培養基，培養基為：蛋白粉23.7％、復合維生素0.2％、礦物質4.7％，其余為 全麥粉，經過鈷60照射滅菌處理；然后接入0.2～0.6克上述給培養好的戶 塵螨螨種；

5)培養：將接種好的培養瓶置于溫度25℃，濕度75％～80％，避光條件 下培養，培養6～8周；

6)收獲：將培養瓶內的戶塵螨與培養基的混合物倒入準備好的三角燒瓶 中，向瓶內加入2～3倍混合物體積的95％乙醇，使混合物被完全浸沒，靜置， 期間手動振搖1～3次，每次2～4分鐘；30～50分鐘后用紗布將混合物與溶 劑分離，混合物在陰涼干燥處風干24～36小時；

7)純化：將戶塵螨原材料根據螨與飼料的物理性質不同、比重不同而逐 層分離純化；重復4～5次此項操作，鏡檢戶塵螨含量達95％以上；

8)保存：2～8℃密封避光保存。