[發(fā)明專利]單管中多重靶核酸的PCR檢測方法及其試劑盒

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 200910157409.3
• 申請日: 2009-07-24
• 公開（公告）號(hào): CN101624629A
• 公開（公告）日: 2010-01-13
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 張文艷;葉成果;龔華斐;楊國翠;李振勇;黃道培
• 申請（專利權(quán)）人: 上海浩源生物科技有限公司
• 主分類號(hào): C12Q1/68
• 分類號(hào): C12Q1/68;G01N21/64;C12Q1/70;C12R1/93
• 代理公司: 北京萬科園知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限責(zé)任公司
• 代理人: 張亞軍;孫張巖

1.非診斷目的的在單個(gè)PCR反應(yīng)容器中多重檢測樣品中多種靶核酸的實(shí)時(shí) PCR方法，每種靶核酸分別是HCV?RNA、HIV?RNA或HBV?DNA，其包括 ，

(1)在所述單個(gè)PCR反應(yīng)容器中混合反轉(zhuǎn)錄酶、樣品、DNA聚合酶、dNT P、選自SEQ?ID?NO：1和2、3和4、5和6的多種靶核酸引物對、選自 SEQ?ID?NO：11、12和13的多種靶核酸探針、選自SEQ?ID?NO：16 和17的內(nèi)對照核酸、選自SEQ?ID?NO：7和8、9和10的內(nèi)對照核酸引 物對、選自SEQ?ID?NO：14和15的內(nèi)對照核酸探針，其中前述各種探 針標(biāo)記有熒光基團(tuán)和淬滅基團(tuán)，而且各種探針標(biāo)記的熒光基團(tuán)的熒光 檢測波長互不相同；

(2)進(jìn)行PCR反應(yīng)，并實(shí)時(shí)檢測不同波長的熒光；

(3)根據(jù)熒光檢測結(jié)果計(jì)算出的Ct值判斷是否有一種或幾種靶核酸存在 于樣品中。

2.權(quán)利要求1所述的方法，其中所述內(nèi)對照核酸被包裝在病毒樣顆粒內(nèi)。

3.權(quán)利要求1所述的方法，其中各種探針標(biāo)記有不同的熒光基團(tuán)。

4.權(quán)利要求1所述的方法，其中PCR反應(yīng)的每個(gè)循環(huán)的條件為94℃10秒、 50℃10秒以及65℃45秒。

5.權(quán)利要求1所述的方法，其中樣品是經(jīng)過磁珠提取法處理過的樣品。

6.權(quán)利要求1所述的方法，其中一種靶核酸的熒光檢測結(jié)果計(jì)算出的Ct值 ≤45，則這種靶核酸存在于樣品中；一種靶核酸的熒光檢測結(jié)果計(jì)算 出的Ct值＞45，而且相應(yīng)內(nèi)對照核酸的熒光檢測結(jié)果計(jì)算出的Ct值＜ 30，則這種靶核酸不存在于樣品中。?

7.一種檢測試劑盒?，所述檢測試劑盒包括，反轉(zhuǎn)錄酶、DNA聚合酶、d NTP、選自SEQ?ID?NO：1和2、3和4、5和6的多種靶核酸引物對、選 自SEQ?ID?NO：11、12和13的多種靶核酸探針、選自SEQ?ID?NO： 16和17的內(nèi)對照核酸、選自SEQ?ID?NO：7和8、9和10的內(nèi)對照核酸 引物對、選自SEQ?ID?NO：14和15的內(nèi)對照核酸探針，其中前述各種 探針標(biāo)記有熒光基團(tuán)和淬滅基團(tuán)，而且各種探針標(biāo)記的熒光基團(tuán)的熒 光檢測波長互不相同。

?

8.權(quán)利要求7所述的一種檢測試劑盒，其中所述內(nèi)對照核酸被包裝在病毒 樣顆粒內(nèi)。

9.權(quán)利要求7所述的一種檢測試劑盒，其中所述檢測試劑盒包括磁珠提取 法所需試劑。