[發(fā)明專利]法呢基焦磷酸合成酶RNA干擾重組慢病毒載體構(gòu)建及用途

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 200910156609.7
• 申請(qǐng)日: 2009-12-29
• 公開（公告）號(hào): CN101805750A
• 公開（公告）日: 2010-08-18
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 胡申江;葉煬
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 浙江大學(xué)
• 主分類號(hào): C12N15/867
• 分類號(hào): C12N15/867;C12N15/113;A61K48/00;A61P9/00;A61P3/00
• 代理公司: 杭州求是專利事務(wù)所有限公司 33200
• 代理人: 張法高;趙杭麗

1.一種針對(duì)法呢基焦磷酸合成酶RNA干擾重組慢病毒載體，其特征在于， 所述載體含有慢病毒骨架質(zhì)粒重組載體pGCSIL-sh-FDS，所述的重組載體是在 p-GCSIL-GFP骨架質(zhì)粒載體的MCS中連接了針對(duì)shRNA的雙鏈DNA片段， 針對(duì)的靶序列為：1#-GACAGCTTTCTACTCTTTC，合成的DNA片段信息為： 1#-1：5’-CcggaaGACAGCTTTCTACTCTTTCTTCAAGAGAGAAAGAGTAGAA A?GCTGTCt?tT?TTTTg-3’，

1#-2：5’-aattcaaaaaaaGACAGCTTTCTACTCTTTCTCTCTTGAAGAAAGAG?T?A GAAAGCTGTCtt-3’。

2.一種針對(duì)法呢基焦磷酸合成酶RNA干擾重組慢病毒載體制備方法，其 特征在于，根據(jù)FDS?mRNA序列，設(shè)計(jì)合成了針對(duì)shRNA的雙鏈DNA片段 如下：

正義鏈：5’-CcggaaGACAGCTTTCTACTCTTTCTTCAAGAGAGAAAGAG T?AGAAA?GCTGTCt?tT?TTTTg-3’

反義鏈：5’-aattcaaaaaaaGACAGCTTTCTACTCTTTCTCTCTTGAAGAAAG AG?T?A?G?AAA?GCTGTCtt-3’

然后將上述DNA片段連接到慢病毒骨架質(zhì)粒載體pGCSIL-GFP中MCS中建 成pGCSIL-sh-FDS重組載體，再將pGCSIL-sh-FDS重組載體、pHelper?1.0、 pHelper?2.0共轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞，獲得所述的重組慢病毒載體LV-sh-FDS。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的針對(duì)法呢基焦磷酸合成酶RNA干擾重組慢病毒 載體制備方法，其特征在于，在合成的DNA片段末端引入Age?I和EcoRI酶 切位點(diǎn)。

4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的針對(duì)法呢基焦磷酸合成酶RNA干擾重組慢病毒 載體制備方法，其特征在于，用Age?I和EcoRI酶將pGCSIL-GFP酶切消化， 回收大片段后將其與DNA片段連接后轉(zhuǎn)化感受態(tài)菌，獲得重組陽性克隆。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的針對(duì)法呢基焦磷酸合成酶RNA干擾重組慢病毒載 體在制備治療心肌肥厚藥物中的應(yīng)用。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的針對(duì)法呢基焦磷酸合成酶RNA干擾重組慢病毒 載體在制備膽固醇代謝調(diào)控藥物中的應(yīng)用。