[發明專利]水樣中硝基苯胺類污染物的固相萃取與HPLC-紫外檢測方法

無效

• 申請號: 200910155743.5
• 申請日: 2009-12-25
• 公開（公告）號: CN101726548A
• 公開（公告）日: 2010-06-09
• 發明（設計）人: 童裳倫;郭贇
• 申請（專利權）人: 浙江大學
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N21/33
• 代理公司: 杭州天勤知識產權代理有限公司 33224
• 代理人: 褚超孚

技術領域

本發明涉及硝基苯胺類污染物的檢測方法，具體涉及一種水樣中硝基 苯胺類污染物的固相萃取與HPLC-紫外(UVD)檢測方法，屬于環境監 測技術領域。

背景技術

芳胺類化合物，包括苯胺及苯胺的各種衍生物，作為極為重要的中間 體被廣泛使用于偶氮染料、抗氧化劑、殺蟲劑和農藥等工業生產中。這些 芳胺類化合物通常被認為是高度致畸和致癌的物質，在水環境中即使是微 量也能對人體和水生物造成急性毒性作用。其中4-硝基苯胺，2，4-二硝基 苯胺及2，6-二硝基苯胺等在我國已被列入環境優先污染物黑名單。因此， 建立快速靈敏地檢測環境樣品中的硝基苯胺類物質含量的方法非常重要。

目前環境樣品的前處理方法主要有液液萃取(LLE)、固相萃取(SPE)、 固相微萃取(SPME)和分散液相微萃取(DLLME)，然后用高效液相色 譜分離，紫外檢測器檢測，也有用氣相色譜/質譜(GC-MS)或毛細管電 泳/電化學檢測(CE-ED)。相較于LLE，SPE和SPME使用的有機溶劑量 小，選擇性好，是目前最為常用的前處理方法。高效液相色譜(HPLC) 對于環境樣品來說是高效且簡便的分離方法，其他分離方法受各種條件限 制，如毛細管電泳，經常需要極端的pH或需要加鹽的緩沖液做流動相才 能獲得較為理想的分離效果。

因此，針對組分復雜的環境樣品探索選擇性檢測芳胺類化合物的固相 萃取與HPLC-紫外檢測方法可實現環境樣品中芳胺類化合物高效且簡便 的分離。

發明內容

本發明提供了一種水樣中硝基苯胺類污染物的固相萃取與HPLC-紫 外檢測方法，采用常規分析儀器實現了對廢水中硝基苯胺類污染物的痕量 檢測，能夠滿足環境樣品檢測的要求。

一種水樣中硝基苯胺類污染物的固相萃取與HPLC-紫外檢測方法，包 括以下步驟：

(1)水樣預處理：將水樣過濾，得到預處理后的水樣；

(2)固相萃取：將固相萃取柱預先用甲醇活化后，再用NH₄Cl-NH₃緩沖液活化，得到活化后的固相萃取柱；

將預處理后的水樣在活化后的固相萃取柱上過柱，再以含乙腈和乙酸 乙酯的水溶液凈化洗去雜質，將柱子抽真空后，以乙酸的甲醇溶液洗脫， 所得洗脫液吹至近干，加乙酸銨水溶液定容，過濾后得到測試樣品，用于 色譜檢測；

(3)HPLC-紫外檢測：采用TC-C18色譜柱，流動相為乙腈與水的混 合溶液，色譜柱溫度為30℃，紫外檢測器波長為220nm～230nm，分析測 試樣品，得到測試樣品的色譜圖，將色譜圖上的峰面積在工作曲線上回歸， 計算測試樣品中硝基苯胺類污染物的含量。

固相萃取條件的選擇：固相萃取條件優化中重要的一步就是洗脫液的 選取，這直接影響到解析效果。在本發明中經初篩選后選取甲醇、乙醇、 乙腈、正己烷、乙酸乙酯、二氯甲烷六種有機試劑中的一種或多種的混合 物實驗洗脫效果，在相同吸附條件下(如最佳吸附條件下)分別用6mL 有機試劑進行洗脫，結果顯示單組份洗脫液中甲醇的洗脫效果為最佳，含 乙酸的甲醇能明顯增強洗脫效果，其中乙酸體積百分濃度為0.3％的含乙 酸的甲醇溶液對4-硝基苯胺、3-硝基苯胺洗脫效果良好，乙酸體積百分濃 度為3％的含乙酸的甲醇溶液對其余三種硝基苯胺洗脫能達到要求。經實 驗篩選，選定乙酸的甲醇溶液作為固相萃取的洗脫液，優選乙酸體積百分 含量為0.1％～0.5％的含乙酸的甲醇溶液和乙酸體積百分含量為1％～5％ 的含乙酸的甲醇溶液作為固相萃取的洗脫液，進一步優選乙酸體積百分含 量為0.3％的含乙酸的甲醇溶液和乙酸體積百分含量為3％的含乙酸的甲醇 溶液作為固相萃取的洗脫液。

經實驗篩選，洗脫液體積在1mL～9mL能基本達到洗脫要求，優選 2mL～8mL洗脫液，為了能基本達到完全洗脫效果進一步優選6mL洗脫 液。

水樣pH值能影響待測污染物在水中的存在形態，從而影響待測目標 化合物在固相萃取柱上的吸附解吸效果。實驗考察了pH值從1～11范圍 pH值變化對富集效果的影響，發現在pH值在弱酸性和接近中性(即pH 值為5～7.1)時回收率較為理想，優選水樣的pH值為6.9～7.1，可通過 pH值為5～7.1的NH₄Cl-NH₃緩沖液來活化固相萃取柱，進而通過活化后 固相萃取柱來調控檢測時水樣的pH，使待測目標化合物在固相萃取柱上 保持較好的吸附解吸效果。