[發(fā)明專(zhuān)利]兩段流加式高密度發(fā)酵合成聚羥基苯烷酸酯的方法

無(wú)效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 200910155703.0
• 申請(qǐng)日: 2009-12-15
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN101717798A
• 公開(kāi)（公告）日: 2010-06-02
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 尚龍安;張艷輝;陳效寧;任紅;姜岷;田頻源
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 浙江大學(xué)寧波理工學(xué)院
• 主分類(lèi)號(hào): C12P7/62
• 分類(lèi)號(hào): C12P7/62;C12R1/40
• 代理公司: 寧波市鄞州甬致專(zhuān)利代理事務(wù)所 33228
• 代理人: 代忠炯

1.一種兩段流加式高密度發(fā)酵合成聚羥基苯烷酸酯的方法，其特征在于：制備方法如下：

(1)第一階段：首先在發(fā)酵培養(yǎng)基中加入不大于0.3g/L的含苯有機(jī)物和5～20g/L的糖作為碳源，然后接入惡臭假單胞菌種子液于發(fā)酵培養(yǎng)基中并在發(fā)酵罐中進(jìn)行發(fā)酵培養(yǎng)，控制發(fā)酵罐的攪拌轉(zhuǎn)速為150～800轉(zhuǎn)/分鐘，以1vvm的流量將無(wú)菌空氣連續(xù)通入發(fā)酵罐內(nèi)，并保持溶解氧濃度高于20％，發(fā)酵溫度為30±2℃，并利用氨水調(diào)節(jié)pH為7.0±0.3；隨時(shí)監(jiān)控發(fā)酵過(guò)程中碳源的消耗量、溶解氧濃度和pH值的變化，當(dāng)溶解氧濃度和pH值同時(shí)迅速上升時(shí)流加碳源，以保證微生物生長(zhǎng)代謝所需；

(2)第二階段：當(dāng)微生物細(xì)胞吸光密度達(dá)到30后，利用不含氮的堿性溶液來(lái)調(diào)節(jié)pH值，并停止補(bǔ)加氨水和其它含氮物質(zhì)，使發(fā)酵液中的氮含量逐漸降低至0.001mol/L，造成發(fā)酵液中氮源供給不足實(shí)現(xiàn)氮限制；同時(shí)，適當(dāng)降低發(fā)酵罐的攪拌轉(zhuǎn)速使發(fā)酵液中溶解氧濃度低于10％，使氧的供給速率小于細(xì)胞正常生長(zhǎng)代謝所需值形成氧限制，從而同時(shí)實(shí)施氮限制和氧限制，并隨時(shí)監(jiān)控溶解氧濃度和pH值的變化，當(dāng)二者的值同時(shí)迅速上升時(shí)，流加碳源，微生物就會(huì)將發(fā)酵液中的碳源通過(guò)微生物代謝合成轉(zhuǎn)化為聚羥基苯烷酸酯。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的兩段流加式高密度發(fā)酵合成聚羥基苯烷酸酯的方法，其特征在于：所述的發(fā)酵培養(yǎng)基組成和配比為：每升發(fā)酵培養(yǎng)基中含蔗糖15g，KH₂PO₄?3g，(NH₄)₂SO₄?1g，MgSO₄·7H₂O?1.2g，檸檬酸1.7g，苯戊酸0.1g，微量元素溶液10ml。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的兩段流加式高密度發(fā)酵合成聚羥基苯烷酸酯的方法，其特征在于：所述的微量元素溶液組成和配比為：每升微量元素溶液中含F(xiàn)eSO₄·7H₂O?10g，CaCl₂?2g，ZnSO₄·7H₂O?2.25g，MnSO₄·4H₂O?0.35g，CuSO₄·5H₂O?1.2g，H₃BO₃?0.25g，Na₂MoO₄·2H₂O?0.12g，35％HCl?10ml。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的兩段流加式高密度發(fā)酵合成聚羥基苯烷酸酯的方法，其特征在于：上述的含苯有機(jī)物為苯戊酸或苯乳酸。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的兩段流加式高密度發(fā)酵合成聚羥基苯烷酸酯的方法，其特征在于：上述的糖為葡萄糖或蔗糖。