[發(fā)明專利]恩諾沙星藥物的同步熒光測(cè)定方法

無(wú)效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 200910154020.3
• 申請(qǐng)日: 2009-10-22
• 公開（公告）號(hào): CN101694465A
• 公開（公告）日: 2010-04-14
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 童裳倫;卓霞軍
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 浙江大學(xué)
• 主分類號(hào): G01N21/64
• 分類號(hào): G01N21/64
• 代理公司: 杭州天勤知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 33224
• 代理人: 胡紅娟

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及恩諾沙星藥物的檢測(cè)方法，具體涉及一種恩諾沙星藥物的同步熒光測(cè)定方法，屬于藥物分析技術(shù)領(lǐng)域。

背景技術(shù)

恩諾沙星(ENRX)，其化學(xué)名為：1-環(huán)丙基-7-(4-乙基哌嗪-1-基)-6-氟-1，4-二氫-4-氧代-3-喹啉酸，是人工合成的含有4-喹諾酮母核的抗菌藥物。恩諾沙星作為動(dòng)物專用的氟喹諾酮類藥物，主要用于治療畜禽細(xì)菌和支原體感染。由于恩諾沙星具有抗菌譜廣、殺菌活性強(qiáng)、毒副作用小與其它抗菌藥無(wú)交叉耐藥性且敏感微生物的MIC較低等優(yōu)點(diǎn)，被廣泛應(yīng)用于各種動(dòng)物感染性疾病的預(yù)防和治療，因此探索一種快速、靈敏檢測(cè)恩諾沙星藥物的分析方法，對(duì)于動(dòng)物食品中該類藥物的殘留檢測(cè)以及它的藥代動(dòng)力學(xué)和藥效動(dòng)力學(xué)研究都具有重要的意義。

關(guān)于恩諾沙星藥物的測(cè)定方法，現(xiàn)有的報(bào)道中主要有紫外分光光度法、高效液相色譜、流動(dòng)注射-化學(xué)發(fā)光法、酶聯(lián)接免疫吸附劑(ELISA)快速測(cè)定法以及熒光光度法，其中關(guān)于ELISA快速測(cè)定法的報(bào)道較多。比如，申請(qǐng)?zhí)枮?00610007255.6的中國(guó)發(fā)明專利申請(qǐng)中公開了一種檢測(cè)恩諾沙星的方法及其專用酶聯(lián)免疫試劑盒。該檢測(cè)恩諾沙星的酶聯(lián)免疫試劑盒，包括恩諾沙星特異性抗體及包被有包被原的酶標(biāo)板和酶標(biāo)記物、恩諾沙星標(biāo)準(zhǔn)品溶液、底物顯示液、終止液、濃縮復(fù)溶液；所述包被原為恩諾沙星抗抗體；所述酶標(biāo)記物為酶標(biāo)恩諾沙星抗原。該方法操作簡(jiǎn)便、費(fèi)用低廉、靈敏度高、能夠現(xiàn)場(chǎng)監(jiān)控且適合大量樣本的定性、定量檢測(cè)動(dòng)物組織如動(dòng)物組織、血清血漿、水產(chǎn)品等樣品中恩諾沙星殘留量。

熒光光度法因其具有靈敏度高、快速的優(yōu)點(diǎn)也被廣泛應(yīng)用于該類藥物的檢測(cè)，但是熒光法在分析含有多種熒光物質(zhì)的組分時(shí)，特別是存在波段重疊的物質(zhì)時(shí)，會(huì)對(duì)目標(biāo)產(chǎn)物造成干擾，無(wú)法得到令人滿意的結(jié)果。采用熒光光度法測(cè)定恩諾沙星也會(huì)存在上述問題，造成結(jié)果不準(zhǔn)確。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明提供了一種快速、靈敏的恩諾沙星藥物的同步熒光測(cè)定方法，利用稀土釔離子(Y³⁺)選擇性增強(qiáng)恩諾沙星藥物發(fā)出的熒光，結(jié)合同步熒光檢測(cè)技術(shù)，消除其它會(huì)發(fā)射熒光的物質(zhì)的干擾，實(shí)現(xiàn)樣品中痕量恩諾沙星藥物的測(cè)定。

一種恩諾沙星藥物的同步熒光測(cè)定方法，包括以下步驟：

(1)配制Y³⁺貯備液：將氧化釔溶于鹽酸中，加熱蒸發(fā)至近干，加水溶解并定容，配制Y³⁺濃度為1.0×10^-3～1.0×10^-1mol/L的Y³⁺貯備液；

(2)將0.2～2.0mL?pH＝5.8～6.8、六亞甲基四胺濃度為0.5～2.0mol/L的六亞甲基四胺(HMA)-鹽酸緩沖溶液，0.5～2.0mL?Y³⁺貯備液和待測(cè)樣品混合，加水定容至10mL，搖勻后在室溫放置5～90min，得到Y(jié)³⁺濃度為5×10^-5～2×10^-4mol/L的供試液；

(3)將供試液置于同步熒光分析儀的1cm石英比色池中，設(shè)定激發(fā)波長(zhǎng)與發(fā)射波長(zhǎng)的波長(zhǎng)差Δλ為80～100nm進(jìn)行同步熒光掃描，掃描速度為300～1000nm/min，激發(fā)狹縫寬度和發(fā)射狹縫寬度均為5～15nm，測(cè)定熒光強(qiáng)度。

作為優(yōu)選，所述的恩諾沙星藥物的同步熒光測(cè)定方法，包括以下步驟：

(1)配制Y³⁺貯備液：將氧化釔溶于鹽酸中，加熱蒸發(fā)至近干，加水溶解并定容，配制Y³⁺濃度為1.0×10^-3mol/L的Y³⁺貯備液；

(2)將0.2～2.0mL?pH＝6.3、六亞甲基四胺濃度為1.0mol/L的六亞甲基四胺-鹽酸緩沖溶液，0.5～2.0mL?Y³⁺貯備液和待測(cè)樣品混合，加水定容至10mL，搖勻后在室溫放置20min，得到Y(jié)³⁺濃度為1.0×10^-4mol/L的供試液；

(3)將供試液置于同步熒光分析儀的1cm石英比色池中，設(shè)定激發(fā)波長(zhǎng)與發(fā)射波長(zhǎng)的波長(zhǎng)差Δλ為90nm進(jìn)行同步熒光掃描，掃描速度為500nm/min，激發(fā)狹縫寬度和發(fā)射狹縫寬度均為10nm，測(cè)定熒光強(qiáng)度。

所述的待測(cè)樣品若選用血清樣品，需經(jīng)乙腈沉淀去除蛋白質(zhì)后用于測(cè)定。