[發明專利]花生葉片DNA微量快速提取方法

有效

• 申請號: 200910152267.1
• 申請日: 2009-07-10
• 公開（公告）號: CN101586102A
• 公開（公告）日: 2009-11-25
• 發明（設計）人: 單世華;萬書波;李春娟;張廷婷;閆彩霞
• 申請（專利權）人: 山東省花生研究所
• 主分類號: C12N15/10
• 分類號: C12N15/10;C07H21/04
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種花生葉片基因組DNA的提取方法，該方法包括如下步驟：

(1)將無菌花生葉片置于離心管中，滴入0.4～0.6mL液氮后將葉片搗碎， 加入0.2～0.3mL提取液并混合均勻；

(2)加入適量濃度為20％的SDSW/V后輕緩搖動離心管，將所得產物進 行溫育，所述20％的SDS的量為0.02～0.06mL；

(3)加入適量的經預冷處理的醋酸鉀緩沖液，混合均勻后進行第一次離 心分離；

(4)將所得上清液加入預冷的異丙醇，混合均勻后在冰凍條件下放置 15～25分鐘；

(5)將上一步驟所得上清液進行第二次離心分離以沉淀核酸，其中所述 第二次離心分離的條件與第一次相同；離心后用-20℃預冷5小時以上的乙醇 漂洗沉淀，漂洗后干燥沉淀，隨后用適量Tris-EDTA溶液干燥沉淀，溶解所述 沉淀用的Tris-EDTA溶液的量為0.2～0.4mL；

(6)去除DNA提取液中的RNA。

2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟(1)中的所述無菌花 生葉片的取用量為0.1～0.2g。

3.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟(1)中所述液氮的用 量為0.4～0.6mL，溫育時間為12～15分鐘，溫育溫度為60～65℃。

4.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述20％的SDS的量為 0.04mL。

5.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述20％的SDS的量為 0.03～0.05mL。

6.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟(3)中所述KAc的 用量為0.2～0.4ml，加入后輕緩搖勻進行冰浴，時間為15～25分鐘。

7.根據權利要求6所述的方法，其特征在于，所述醋酸鉀緩沖液的濃度 為3～5M，其使用量是0.2～0.4mL，該醋酸鉀緩沖液在加入反應物之前在4℃ 預冷2～3小時，輕緩混勻后冰浴10～30分鐘。

8.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述第一次離心分離的轉 速為1000～15000r.分鐘^-1，離心分離進行12～18分鐘。

9.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，離心后所得上清液中加入 0.2～0.4mL的異丙醇，該異丙醇在加入上清液之前，-15～-20℃的溫度下，預冷 10小時以上；混合均勻后在所述冰凍條件下放置15～25分鐘。

10.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，在所述乙醇用于漂洗沉淀 之前，在冰凍條件下，預冷5小時以上，該乙醇的濃度為70～75％W/V。