[發明專利]檢測銅綠假單胞菌重要耐藥基因的基因芯片及其試劑盒

無效

• 申請號: 200910152073.1
• 申請日: 2009-07-28
• 公開（公告）號: CN101967508A
• 公開（公告）日: 2011-02-09
• 發明（設計）人: 王磊;康海蔚;曹勃陽;馮露
• 申請（專利權）人: 天津生物芯片技術有限責任公司
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C40B40/06;C12R1/385
• 代理公司: 北京連和連知識產權代理有限公司 11278
• 代理人: 賀小明

1.一種用于檢測銅綠假單胞菌重要耐藥基因的基因芯片，包括固相載體和固定在該固相載體上的寡聚核苷酸探針，其特征在于該寡聚核苷酸探針包含下述DNA片段中的至少一種：

1)從carb、tem、imp、oxa?groupI、oxa?groupII、aac(3’)-I、aac(3’)-II、aac(6’)-Ib、aac(6’)-II、aadB基因和細菌16S?rRNA基因中所選取的至少一種DNA片段；

2)從上述1)中選取的至少一種DNA片段的互補DNA片段。

2.根據權利要求1所述的基因芯片，其特征在于所述寡核苷酸探針具有SEQ?ID?NO：1-SEQ?ID?NO：29所示的核苷酸序列，或不同于SEQ?IDNO：1-SEQ?ID?NO：29所示的核苷酸序列但編碼的氨基酸序列與SEQ?IDNO：1-SEQ?ID?NO：29所示核苷酸序列所編碼的氨基酸序列相同的序列。

3.權利要求1或2所述的基因芯片用于銅綠假單胞菌耐藥基因carb、tem、，imp、oxa?groupI、oxa?groupII、aadB、aac(3’)-I、aac(3’)-II、aac(6’)-Ib、aac(6’)-II中至少一種的檢測。

4.使用權利要求1所述的基因芯片檢測耐藥基因的方法，其特征在于包含步驟：

1)根據銅綠假單胞菌的耐藥基因設計并制備出用于PCR擴增的引物；

2)制備待測樣品的基因組DNA，使用步驟1)中的引物，按一定濃度混合，對待測樣品基因組DNA進行PCR擴增并純化PCR產物，制得靶序列；

3)標記步驟2)中得到的靶序列；

4)將步驟3)標記后的靶序列與權利要求1所述的基因芯片雜交；

5)用生物芯片掃描儀獲取雜交信號并分析雜交結果。

5.根據權利要求4所述的方法，其特征在于所述步驟1)中使用的PCR引物為SEQ?ID?NO：30-SEQ?ID?NO：51所示核苷酸序列中的至少一種。

6.一種檢測銅綠假單胞菌耐藥基因的試劑盒，其特征在于包含權利要求1所述的基因芯片。

7.根據權利要求6所述的試劑盒，其特征在于還包含SEQ?IDNO：1-SEQ?ID?NO：29所示核苷酸序列或其互補核苷酸序列的探針序列中的至少一種。

8.根據權利要求6或7所述的試劑盒，其特征在于還包含SEQ?IDNO：30-SEQ?ID?NO：51所示核苷酸序列的PCR引物。

9.根據權利要求6所述的試劑盒，其特征在于還包含雜交盒、雜交液。

10.權利要求6所述的試劑盒用于銅綠假單胞菌耐藥基因carb，tem，imp，oxa?groupI，oxa?groupII，aac(6’)-Ib，aac(6’)-II，aac(3’)-I，aac(3’)-II，aadB中至少一種的檢測。