[發(fā)明專利]對(duì)含有特定序列的第一特異性mRNA進(jìn)行定量的方法

無(wú)效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 200910149383.8
• 申請(qǐng)日: 2004-10-29
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN101696448A
• 公開(kāi)（公告）日: 2010-04-21
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 三橋?qū)⑷?/a>
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 日立化成工業(yè)株式會(huì)社;日立化成研究中心公司
• 主分類號(hào): C12Q1/68
• 分類號(hào): C12Q1/68
• 代理公司: 北京銀龍知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11243
• 代理人: 鐘晶

本申請(qǐng)是申請(qǐng)日為2004年10月29日，國(guó)際申請(qǐng)?zhí)朠CT/US2004/036309，國(guó)家申請(qǐng)?zhí)枮?00480032335.6，發(fā)明名稱為“用于高通量定量全血中mRNA的設(shè)備和方法”的申請(qǐng)的分案申請(qǐng)。

相關(guān)申請(qǐng)

本申請(qǐng)是2003年10月30日提交的美國(guó)專利申請(qǐng)No.10/698,967的部分繼續(xù)申請(qǐng)，該美國(guó)專利申請(qǐng)是2003年4月24日用英語(yǔ)提交并有望用英語(yǔ)公布的國(guó)際專利申請(qǐng)PCTUS03/12895的部分繼續(xù)申請(qǐng)，并且本申請(qǐng)還要求2002年4月24日提交的臨時(shí)申請(qǐng)No.60/375,472的優(yōu)先權(quán)。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及高通量分離和定量全血中mRNA。更特別地，本發(fā)明涉及用于分離和擴(kuò)增mRNA的方法和設(shè)備，其使用附著到固定寡聚(dT)的多孔板上的白細(xì)胞濾器的組合。

背景技術(shù)

分子生物學(xué)領(lǐng)域的研究顯示可以從對(duì)其核糖核酸(RNA)的研究中推導(dǎo)出細(xì)胞的遺傳起源和功能活性。這種信息可以在臨床實(shí)踐中用于診斷感染、檢測(cè)細(xì)胞表達(dá)致癌基因的出現(xiàn)、檢測(cè)家族性疾病、監(jiān)測(cè)寄主防御機(jī)制的狀態(tài)以及確定HLA類型或者特性的其它標(biāo)記。RNA以三種功能不同的形式存在：核糖體RNA(rRNA)、轉(zhuǎn)運(yùn)RNA(tRNA)和信使RNA(mRNA)。然而穩(wěn)定的rRNA和tRNA參與翻譯的催化過(guò)程，mRNA分子攜帶遺傳信息。總RNA中由只有大約1～5％的mRNA、大約15％的tRNA以及大約80％的rRNA組成。

mRNA是重要的診斷工具，特別是當(dāng)其用于定量觀測(cè)基因的上調(diào)或者下調(diào)時(shí)。人的外周血是用于mRNA分析非常好的臨床來(lái)源。例如，對(duì)血中特異性嵌合mRNA的監(jiān)測(cè)可以暗示不正常細(xì)胞的出現(xiàn)，并且應(yīng)用于慢性骨髓細(xì)胞性白血病(CML)的分子檢測(cè)(Kawasaki?E.S.，Clark?S.S.，Coyne?M.Y.，SmithS.D.，Champlin?R.，Witte?O.N.和McCormick?F.P.1988年，Diagnosis?of?chronicmyeloid?and?acute?lymphocytic?leukemias?by?detection?of?leukemia-specificmRNA?sequences?amplified?in?vitro，Proc.Natl.Acad.Sci.美國(guó)85：5698～5702，Pachmann?K.，Zhao?S.，Schenk?T.，Kantarjian?H.，El-Naggar?A.K.，Siciliano?M.j.，Guo?J.Q.，Arlinghaus?R.B.和Andreeff?M.2001年，Expression?of?bcr-able?mRNAindividual?chronic?myelogenous?leukaemia?cells?as?determined?by?in?situamplification，Br.J.Haematol.112：749-59)。通過(guò)監(jiān)測(cè)癌特異性mRNA可以檢測(cè)微轉(zhuǎn)移的癌細(xì)胞，例如對(duì)直腸癌監(jiān)測(cè)癌胚抗原(CEA)、對(duì)前列腺癌監(jiān)測(cè)前列腺特異抗原(PSA)和對(duì)甲狀腺癌監(jiān)測(cè)甲狀腺球蛋白(Wingo?S.T.，RingelM.D.，Anderson?J.S.，Patel?A.D.，Lukes?Y.D.，Djuh?Y.Y.，Solomon?B.，NicholsonD.，Balducci-Silano?P.L.，Levine?M.A.，F(xiàn)rancis?G.L.和Tuttle?R.M.1999年，Quantitative?reverse?transcription-PCR?measurement?of?thyroglobulin?mRNA?inperipheral?blood?of?healthy?subjects，Clin.Chem.45：785-89)以及對(duì)黑色素瘤監(jiān)測(cè)酪氨酸酶(Pelkey?T.J.，Frierson?H.F.Jr.和Bruns?D.E.1996年，Molecular?andimmunological?detection?of?circulating?tumor?cells?and?micrometastasis?from?solidtumors，Clin.Chem.42：1369～81)。而且，由于這些癌特異性mRNA水平在治療后發(fā)生改變，特異mRNA的定量在后續(xù)治療過(guò)程中提供了有用的指標(biāo)。