[發(fā)明專利]對含有特定序列的第一特異性mRNA進行定量的方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 200910149383.8
• 申請日: 2004-10-29
• 公開（公告）號: CN101696448A
• 公開（公告）日: 2010-04-21
• 發(fā)明（設計）人: 三橋?qū)⑷?/a>
• 申請（專利權(quán)）人: 日立化成工業(yè)株式會社;日立化成研究中心公司
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68
• 代理公司: 北京銀龍知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11243
• 代理人: 鐘晶

1.一種對含有來自樣品特定序列的第一特異性mRNA進行定量的方法，包括：

a)使用已知量的第二特異性mRNA摻標所述樣品；

b)純化樣品中的多聚AmRNA；

c)由樣品中的mRNA制備cDNA；

d)相應于樣品中第一特異性mRNA和第二特異性mRNA的每個定量cDNA；

e)確定第二特異性mRNA的回收百分率；以及

f)使用第二特異性mRNA的回收百分率來確定第一特異性mRNA的初始量。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，還包括通過下述方法對第三特異性mRNA進行定量，其包括：

a)使用已知量的第二特異性mRNA摻標所述樣品；

b)純化樣品中的多聚A?mRNA；

c)由樣品中的mRNA中制備cDNA；

d)相應于樣品第三特異性mRNA和第二特異性mRNA的每個定量cDNA；

e)確定第二特異性mRNA的回收百分率；以及

f)使用第二特異性mRNA的回收百分率來確定第三特異性mRNA的初始量。

3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的方法，其中第二特異性mRNA的序列不同于第一特異性mRNA。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法，其中第二特異性mRNA的序列與第一特異性mRNA有小于90％的同源性或者有至少10％長度上的差異。

5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法，其中其中第二特異性mRNA的序列與第一特異性mRNA有小于85％的同源性或者有至少5％長度上的差異。

6.根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法，其中其中第二特異性mRNA的序列與第一特異性mRNA有小于75％的同源性或者有至少2％長度上的差異。

7.根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法，其中其中第二特異性mRNA的序列與第一特異性mRNA有小于65％的同源性或者有至少1％長度上的差異。

8.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的方法，進一步包括提供多個不同的含有不同序列的第一特異性mRNA。

9.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的方法，進一步包括提供多個不同的含有不同序列的第二特異性mRNA。

10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的方法，進一步包括提供多個不同含有不同序列的第一特異性mRNA。

11.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的方法，其中從樣品中純化多聚A?mRNA包括將多聚A與寡聚(dT)雜交。

12.根據(jù)權(quán)利要求11所述的方法，其中寡聚(dT)被固定。

13.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的方法，其中在純化之前，將第二特異性mRNA加入到樣品中。

14.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的方法，其中樣品包括全血。

15.根據(jù)權(quán)利要求14所述的方法，進一步包括將樣品和第二特異性mRNA加入到過濾設備的孔中。

16.根據(jù)權(quán)利要求15所述的方法，其中從樣品純化多聚AmRNA包括將裂解緩沖液施加到孔中。

17.根據(jù)權(quán)利要求16所述的方法，其中過濾設備是過濾膜。

18.根據(jù)權(quán)利要求17所述的方法，還包括從全血中去除紅細胞和血組分而不是白細胞，以得到白細胞。

19.根據(jù)權(quán)利要求18所述的方法，其中在過濾之前全血是冷凍的。

20.根據(jù)權(quán)利要求18所述的方法，其中在過濾之前，對樣品施加抗凝血劑。

21.根據(jù)權(quán)利要求18所述的方法，其中過濾膜附著到多孔過濾板上。

22.根據(jù)權(quán)利要求18所述的方法，其中每個過濾板施加10～1e¹⁰個拷貝的摻標對照RNA。

23.根據(jù)權(quán)利要求18所述的方法，其中每個過濾板施加1e⁵～1e¹⁰個拷貝的摻標對照RNA。

24.根據(jù)權(quán)利要求18所述的方法，其中過濾膜是PBT纖維膜。

25.根據(jù)權(quán)利要求18所述的方法，其中白細胞被捕獲在多個層疊在一起的過濾膜上。