[發明專利]用于高通量定量mRNA的裂解緩沖液、裂解細胞的方法和確定白細胞特異性mRNA精確量的方法

有效

• 申請號: 200910149382.3
• 申請日: 2004-10-29
• 公開（公告）號: CN101696409A
• 公開（公告）日: 2010-04-21
• 發明（設計）人: 三橋將人
• 申請（專利權）人: 日立化成工業株式會社;日立化成研究中心公司
• 主分類號: C12N15/10
• 分類號: C12N15/10;C12Q1/68
• 代理公司: 北京銀龍知識產權代理有限公司 11243
• 代理人: 鐘晶

本申請是申請日為2004年10月29日，國際申請號PCT/US2004/036309，國家申請號為200480032335.6，發明名稱為“用于高通量定量全血中mRNA的設備和方法”的申請的分案申請。?

相關申請?

本申請是2003年10月30日提交的美國專利申請No.10/698,967的部分繼續申請，該美國專利申請是2003年4月24日用英語提交并有望用英語公布的國際專利申請PCTUS03/12895的部分繼續申請，并且本申請還要求2002年4月24日提交的臨時申請No.60/375,472的優先權。?

技術領域

本發明涉及高通量分離和定量全血中mRNA。更特別地，本發明涉及用于分離和擴增mRNA的方法和設備，其使用附著到固定寡聚(dT)的多孔板上的白細胞濾器的組合。?

背景技術

分子生物學領域的研究顯示可以從對其核糖核酸(RNA)的研究中推導出細胞的遺傳起源和功能活性。這種信息可以在臨床實踐中用于診斷感染、檢測細胞表達致癌基因的出現、檢測家族性疾病、監測寄主防御機制的狀態以及確定HLA類型或者特性的其它標記。RNA以三種功能不同的形式存在：核糖體RNA(rRNA)、轉運RNA(tRNA)和信使RNA(mRNA)。然而穩定的rRNA和tRNA參與翻譯的催化過程，mRNA分子攜帶遺傳信息。總RNA中由只有大約1～5％的mRNA、大約15％的tRNA以及大約80％的rRNA組成。?

mRNA是重要的診斷工具，特別是當其用于定量觀測基因的上調或者下調時。人的外周血是用于mRNA分析非常好的臨床來源。例如，對血中特異?性嵌合mRNA的監測可以暗示不正常細胞的出現，并且應用于慢性骨髓細胞性白血病(CML)的分子檢測(Kawasaki?E.S.，Clark?S.S.，Coyne?M.Y.，SmithS.D.，Champlin?R.，Witte?O.N.和McCormick?F.P.1988年，Diagnosis?of?chronicmyeloid?and?acute?lymphocytic?leukemias?by?detection?of?leukemia-specificmRNA?sequences?amplified?in?vitro，Proc.Natl.Acad.Sci.美國85：5698～5702，Pachmann?K.，Zhao?S.，Schenk?T.，Kantarjian?H.，El-Naggar?A.K.，Siciliano?M.J.，Guo?J.Q.，Arlinghaus?R.B.和Andreeff?M.2001年，Expression?of?bcr-able?mRNAindividual?chronic?myelogenous?leukaemia?cells?as?determined?by?in?situamplification，Br.J.Haematol.112：749-59)。通過監測癌特異性mRNA可以檢測微轉移的癌細胞，例如對直腸癌監測癌胚抗原(CEA)、對前列腺癌監測前列腺特異抗原(PSA)和對甲狀腺癌監測甲狀腺球蛋白(Wingo?S.T.，RingelM.D.，Anderson?J.S.，Patel?A.D.，Lukes?Y.D.，Djuh?Y.Y.，Solomon?B.，NicholsonD.，Balducci-Silano?P.L.，Levine?M.A.，Francis?G.L.和Tuttle?R.M.1999年，Quantitative?reverse?transcription-PCR?measurement?of?thyroglobulin?mRNA?inperipheral?blood?of?healthy?subjects，Clin.Chem.45：785-89)以及對黑色素瘤監測酪氨酸酶(Pelkey?T.J.，Frierson?H.F.Jr.和Bruns?D.E.1996年，Molecular?andimmunological?detection?of?circulating?tumor?cells?and?micrometastasis?from?solidtumors，Clin.Chem.42：1369～81)。而且，由于這些癌特異性mRNA水平在治療后發生改變，特異mRNA的定量在后續治療過程中提供了有用的指標。?