[發明專利]一種生物樣品中蛋白質組的分析方法

有效

• 申請號: 200910146883.6
• 申請日: 2009-06-11
• 公開（公告）號: CN101685080A
• 公開（公告）日: 2010-03-31
• 發明（設計）人: 高尚先
• 申請（專利權）人: 高尚先
• 主分類號: G01N27/62
• 分類號: G01N27/62;G01N1/28;G01N33/68;G01N33/574
• 代理公司: 北京元中知識產權代理有限責任公司
• 代理人: 王明霞

技術領域

本發明涉及一種生物樣品中蛋白質組分析方法，特別是一種鑒定不同生物 樣品中特異表達蛋白組的分析方法，更確切的說，涉及到鑒定腫瘤細胞產生的 特異表達蛋白的方法，屬于生物醫藥領域。

背景技術

目前在大、中城市里，醫院門診部所見到的癌癥病人，一般說來，早期(I 期)病人約占5％～10％，中期(II期)約占20％，較晚期的病人(III+IV期) 約占70％～75％。較晚期病人治療后的5年生存率只有10％～30％。從60年代 至今，我國一些醫務人員和科研人員在不同的癌癥高發區、高危人群中展開了 癌癥的初篩、普查普治，發現了許多早期病人，早期癌癥病人約占普查發現癌 癥總數的30％～70％。早期癌癥病人正規治療后的5年生存率高達70％-95％。

對癌癥控制的策略是預防為主，防治結合，重在三早，三早是指早期發現， 早期診斷和早期治療。只有這樣，才能以較少的投入，獲得較好的控制癌癥的 效果。早期得到診斷的癌癥病人住院治療，在腫瘤體積小、沒有發生轉移的情 況下，患者的自身免疫功能良好，往往在手術切除即可治愈，住院治療時間短， 花費的醫療費用少。但當較晚期才確診的癌癥病人，需要應用綜合治療，治療 時間長，醫療費用高，而且治療效果差。

所以，腫瘤治療的關鍵在于早期發現和早期治療。目前認為：能在CT、MRI 下觀察到的占位性病變已算不上最早期，當然也不是治療的最佳時期。應該從 細胞生物學角度看癌變，并做到早期診斷，才能夠將腫瘤扼殺在細胞萌芽期或 腫瘤形態可見的最早期。

由于不論是細胞的正常功能還是病理特性都在一定程度上取決于細胞所表 達的蛋白質功能。因此，鑒定細胞內表達的蛋白質組的區別，可用于診斷疾病， 并可用于藥物開發和疾病治療。而要進行蛋白質組表達和功能的差異化分析， 要求能夠達到分辨細胞內分子的復雜混合物的程度。但細胞內許多物質往往以 微量存在，目前用于分析蛋白的方法在上述各方面都有局限，用這些常規手段 難以進行定性鑒定和定量分析。

目前，一種常用的蛋白質分離的方法是凝膠電泳。通常是用凝膠內等電點 聚焦先分離蛋白質組，再用十二烷基硫酸鈉聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE) 進行第二次分離。結果得到一張根據等電點范圍(凈電荷)和大小(質量)來 區分蛋白質的圖。但是該方法存在以下幾方面的局限。首先，該方法只能根據 蛋白質分子質量和等電點(pI)對蛋白質分子進行區分；其次，各維度的分辨率 受到凝膠分辨能力的限制，通常很難區分質量差異小于5％或等電點相近的生 物分子。第三，凝膠的容量和靈敏度都有限，可能無法檢測出少量和微量表達 的生物分子。第四，無法觀察到分子量低于約10～20kDa的小肽。

目前臨床診斷疾病的一般方法是要求特異性地檢測出疾病的已知標記。但 是，制備特異性結合標記并且能在復雜的混合物中鑒別出標記的試劑需要大量 時間，因此阻礙了此類診斷方法的發展。

用質譜的方法測定蛋白質組是較新的方法，如申請號為03148375.5、名稱 為用于生物樣品分析的蛋白指紋法的專利，涉及用滯留層析法捕獲蛋白質組進 行分析的蛋白指紋法。采用質譜法進行鑒別檢測蛋白質組，分析所得數據的形 式是可用計算機讀取的條碼格式(蛋白指紋)。該發明的方法可用于細胞和臨 床疾病的診斷，如腫瘤的診斷。

申請號為200610140288.8、名稱為“用磁珠支持基質及質譜判斷正常人與 肝癌的試劑盒和方法”的專利申請，涉及一種用磁珠支持基質的方法捕獲生物 樣品中肝癌蛋白質組，用磁性分離器分離磁珠及樣品，無需離心樣品，然后用 質譜法進行分析的蛋白指紋分析。

專利號為ZL03148375.5、名稱為“用于生物樣品分析的蛋白指紋法”的專 利，涉及用滯留層析法捕獲蛋白質組進行分析的蛋白指紋法。

但是以上專利由于其反應條件的設計使其敏感性即早期檢出率仍然有待于 提高。

發明內容

本發明的發明目的在于提供一種生物樣品中蛋白質組的分析方法，該方法 具有更高的敏感性即早期檢出率。

本發明的又一發明目的在于提供一種鑒定生物樣品中特異表達蛋白的分析 方法，特別是在腫瘤形態不可見或可見的情況下，檢測血液或體液中癌細胞產 生的獨特的蛋白質組的方法。

本發明的再一發明目的在于提供一種根據上述方法的原理制備的試劑盒。

為了實現上述發明目的，本發明采用的技術方案為：