[發明專利]一種發酵液中他克莫司的分離純化方法

有效

• 申請號: 200910146385.1
• 申請日: 2009-06-22
• 公開（公告）號: CN101712686A
• 公開（公告）日: 2010-05-26
• 發明（設計）人: 劉忠
• 申請（專利權）人: 魯南制藥集團股份有限公司
• 主分類號: C07D498/18
• 分類號: C07D498/18;A61P31/00
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種從發酵液中分離純化他克莫司的方法，其特征在于，包括如下步驟：

1）在發酵液中加入助濾劑進行攪拌，過濾收集菌體；?

2）用有機溶劑浸提菌體，合并濾液減壓濃縮得濃縮物；

3）步驟2）濃縮物進行大孔吸附樹脂層析，梯度洗脫，收集洗脫液，濃縮；

4）步驟3）濃縮物加入有機溶劑萃取，萃取液抽濾，減壓濃縮至油狀物；

5）步驟4）油狀物進行硅膠柱層析，梯度洗脫，收集洗脫液，濃縮；

6）步驟5）濃縮物經有機溶劑溶解，重結晶，即得產品。

2.如權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟1）所述助濾劑為硅藻土、珍珠巖或其混合物。

3.如權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟1）所述攪拌時間為15-30分鐘。

4.如權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟2）所述有機溶劑為甲醇、乙腈、丙酮。

5.如權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟2）室溫浸提菌體3-4次，每次浸提時間1-4小時。

6.如權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟2）在減壓條件下，濃縮回收有機溶劑，得到濃縮物。

7.如權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟3）所述的大孔吸附樹脂為非極性大孔吸附樹脂X-5、D4020、或HZ818。

8.如權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟3）所述的洗脫劑為以下任一溶液：20%-80%甲醇的水溶液；含有20%-75%丙酮的水溶液；含有25%-75%乙醇的水溶液。

9.如權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟4）所述有機溶劑為乙酸乙酯、乙酸丁酯或氯仿。

10.如權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟5）所述的硅膠為200～300目的層析硅膠。

11.如權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟5）所述的洗脫劑為以下任一溶液：含35%-70%乙酸乙酯的正己烷混合液；含35%-70%乙酸乙酯的環己烷混合液；含15%-50%丙酮的環己烷混合液。

12.如權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟6）所述有機溶劑為乙酸乙酯。

13.如權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟6）重結晶時在濃縮后的萃取液中緩慢加入正己烷或環己烷至有少量晶體析出，然后將溶液置于4℃繼續析晶。