[發明專利]一種生長抑素的合成方法

有效

• 申請號: 200910142420.2
• 申請日: 2009-06-03
• 公開（公告）號: CN101570570A
• 公開（公告）日: 2009-11-04
• 發明（設計）人: 達朝山;蘇亞寧;洪滿貴;保英明;曹福軍
• 申請（專利權）人: 蘭州大學;甘肅中科藥源生物工程股份有限公司
• 主分類號: C07K7/08
• 分類號: C07K7/08;C07K1/06;C07K1/02;A61P5/02;A61P5/08;A61P5/48;A61P1/04;A61P1/18;A61P7/04
• 代理公司: 蘭州振華專利代理有限責任公司
• 代理人: 張 晉

1.一種生長抑素液相合成方法，其特征是首先分別全合成Thr(Bzl)-Phe-Thr(Bzl)-Ser(Bzl)-Cys(MeOBzl)-OBzl、Boc-Phe-Trp-Lys(Z)-OH、Boc-Asn-Phe-OH和Boc-Ala-Gly-Cys(MeOBzl)-Lys(Z)-OH四個片段肽，再用EDCI/HOBt進行片段縮合，合成全保護的十四肽，用三氟甲磺酸和苯甲醚系統脫肽鏈所有的保護基，得到還原性生長抑素，對還原性生長抑素氧化，獲得生長抑素粗品，再經C18制備柱分離純化，收集樣品洗脫液凍干后，得生長抑素精品，其中：?

片段I：TFA·Thr(Bzl)-Phe-Thr(Bzl)-Ser(Bzl)-Cys(MeOBzl)-OBzl的合成方法是：?

以Boc-Cys(MeOBzl)-OBzl為起始原料，用TFA/CH₂Cl₂脫掉Boc后作為氨基組分，Boc-Ser?(Bzl)-OH作為羧基組分，采用混合酸酐法合成二肽Boc-Ser(Bzl)-Cys(Mob)-OBzl，再用TFA/CH₂Cl₂脫掉Boc得到氨基組分，依次用混合酸酐法，接Boc-Thr(Bzl)-OH、Boc-Phe-OH、Boc-Thr(Bzl)-OH、得到Boc-Thr(Bzl)-Phe-Thr-(Bzl)-Ser(Bzl)-Cys(MeOBzl)-OBzl，用TFA/CH₂Cl₂脫Boc，用乙醚沉淀，異丙醇重結晶得到TFA·Thr(Bzl)-Phe-Thr(Bzl)-Ser(Bzl)-Cys(Me?OBzl)-OBzl；?

片段II：Boc-Phe-Trp-Lys(Z)-OH的合成方法是：?

以NH₂-Lys(Z)-OMe 作為氨基組分，采用混合酸酐法接肽，依次接Boc-Trp-OH、Boc-Phe-OH，得到三肽Boc-Trp-Phe-Lys(Z)-OMe，2N?NaOH皂化，得到Boc-Phe-Trp-Lys(Z)-OH；?

片段III：Boc-Asn-Phe-OH的合成方法是：?

以NH₂-Phe-OMe?作為氨基組分，Boc-Asn-OH作為羧基組分，DIC作為縮合劑，采用碳二亞胺法，合成Boc-Asn-Phe-OMe，2N?NaOH皂化，得到Boc-Asn-Phe-OH；?

片段IV：Boc-Ala-Gly-Cys(MeOBzl)-Lys(Z)-OH的合成方法是：?

以NH₂-Lys(Z)-OMe?作為氨基組分，采用混合酸酐法接肽，依次接Boc-Cys(MeOBzl)-OH、Boc-Gly-OH、Boc-Ala-OH得到Boc-Ala-Gly-Cys(MeOBzl)-Lys(Z)-OMe，2N?NaOH皂化，得到Boc-Ala-Gly-Cys(MeOBzl)-Lys(Z)-OH；?

片段縮合方法是用上述合成的4個片段，用EDCI/HOBT為縮合劑，合成得到生長抑素全保護的線性十四肽Boc-Ala-Gly-Cys(MeOBzl)-Lys(Z)-Asn-Phe-Phe-Trp-Lys(Z)-Thr(Bzl)-Phe-Thr?(Bzl)-Ser(Bzl)-Cys(MeOBzl)-OBzl；?

還原性生長抑素的合成是：?

將合成的生長抑素全保護的線性肽加到CF₃SO₃H的三氟乙酸溶液，以苯甲醚為清除劑，在0℃進行反應，反應結束后用乙醚析出固體，過濾收集固體并干燥處理得生長抑素粗品；?

氧化環合與純化工藝是：?

將得到的線性粗肽進行室溫氧化環合，經自然氧化后進行凍干處理得生長抑素粗品，將粗品溶入水中，經過濾，濾液C18制備柱分離純柱純化后合并樣品，凍干處理獲得生長抑素；?

所述用混合酸酐合成片段I、II和IV時采用氯甲酸烷基酯活化羧基，所用氯甲酸烷基酯為氯甲酸乙酯、氯甲酸丙酯、氯甲酸異丙酯、氯甲酸丁酯或氯甲酸異丁酯(ClCOOR，R＝Et、Pr、iPr、Bu、iBu)。?

2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，使用混合酸酐合成片段I、II和IV時采用的氯甲酸烷基酯為氯甲酸異丁酯。?

3.根據權利要求1或2所述生長抑素液相合成方法，其特征是：?

A.肽片段合成?

a.片段I.Thr(Bzl)-Phe-Thr(Bzl)-Ser(Bzl)-Cys(MeOBzl)-OBzl的合成：?

稱取4.1g?Boc-Ser(Bzl)-OH用50ml四氫呋喃溶解，加入1.53ml?N-甲基嗎啉，在冰鹽浴冷卻至-15℃，攪拌下緩慢滴加1.8ml的氯甲酸異丁酯，2-4分鐘后，緩慢加入預冷到0℃以下溶有4.6g?Cys(MeOBzl)-OBzl的20ml四氫呋喃溶液，維持在-15℃反應30分鐘后撤去冰鹽浴，恢復室溫反應，反應結束后過濾除去鹽，濃縮濾液，殘留物溶于乙酸乙酯，用5％NaOH、水、5％HCl、水、飽和食鹽水依次洗滌后，用無水NaSO₄ 干燥，濃縮減壓去溶劑，得到白色固體Boc-Ser(Bzl)-Cys(MeOBzl)-OBzl；?

將得到的Boc-Ser(Bzl)-Cys(MeOBzl)-OBzl8.04g倒入圓底燒瓶，加入10ml二氯甲烷，冷卻至0℃以下，加入10ml三氟乙酸，加完恢復室溫反應，反應結束后，減壓濃縮，殘余物用乙酸乙酯溶解，用5％NaOH洗至溶液中性，飽和食鹽水洗，干燥，過濾，濃縮得油狀物Ser(Bzl)-Cys(MeOBzl)-OBzl，將所得的油狀物用30ml四氫呋喃溶解，放置冰箱預冷至0℃以下備用，再稱取Boc-Thr(Bzl)-OH4.08g用50ml四氫呋喃溶解，加入1.45ml?N-甲基嗎啉，在冰鹽浴-15℃下，攪拌下緩慢滴加1.72ml的氯甲酸異丁酯，2-4分鐘后，加入預冷至0℃以下溶有Ser(Bzl)-Cys(MeOBzl)-Obzl的30ml四氫呋喃，維持在-15℃反應30分鐘后撤去冰鹽浴，恢復室溫反應4-6小時，反應結束后過濾除去鹽，濃縮濾液，殘留物溶于乙酸乙酯，用5％NaOH、水、5％HCl、水、飽和食鹽水依次洗滌后，用無水NaSO₄ 干燥，濃縮減壓去溶劑，再將得到的白色固體用乙酸乙酯和石油醚結晶，得白色固體Boc-Thr(Bzl)-Ser(Bzl)-Cys(MeOBzl)-OBzl；?

將得到的Boc-Thr(Bzl)-Ser(Bzl)-Cys(MeOBzl)-OBzl9.8g倒入圓底燒瓶，加入10ml二氯?甲烷，冷卻至0℃以下，加入10ml三氟乙酸，加完恢復室溫反應，反應結束后，減壓濃縮，殘余物用乙酸乙酯溶解，用5％NaOH洗至溶液中性，飽和食鹽水洗，干燥，過濾，濃縮得油狀物Thr(Bzl)-Ser(Bzl)-Cys(MeOBzl)-OBzl，所得的油狀物用30ml四氫呋喃溶解，放置冰箱預冷至0℃以下備用，再稱取Boc-Phe-OH3.3g，用40ml四氫呋喃溶解，加入1.35ml?N-甲基嗎啉，在冰鹽浴-15℃下，攪拌下緩慢滴加1.6ml氯甲酸異丁酯，2-4分鐘后，加入預冷至0℃以下的溶有Thr(Bzl)-Ser(Bzl)-Cys(MeOBzl)-Obzl的20ml的四氫呋喃，維持在-15℃反應30分鐘后撤去冰鹽浴，恢復室溫反應至反應結束，過濾除去鹽，濃縮濾液，殘留物溶于乙酸乙酯，用5％NaOH、水、5％HCl、水、飽和食鹽水依次洗滌后，用無水NaSO₄ 干燥，濃縮減壓去溶劑，得到的固體用乙酸乙酯和石油醚結晶，得到白色固體Boc-Phe-Thr(Bzl)-Ser(Bzl)-Cys(MeOB?zl)-OBzl；?

將得到的Boc-Phe-Thr(Bzl)-Ser(Bzl)-Cys(MeOBzl)-OBzl11g倒入圓底燒瓶，加入10ml二氯甲烷，冷卻至0℃以下，加入10ml三氟乙酸，加完后恢復到室溫進行反應，反應結束后，減壓濃縮，殘余物用乙酸乙酯溶解，用5％NaOH洗至溶液中性，飽和食鹽水洗，干燥，過濾，濃縮得油狀物為Phe-Thr(Bzl)-Ser(Bzl)-Cys(MeOBzl)-OBzl，所得的油狀物用30ml四氫呋喃溶解，放置冰箱預冷至0℃以下備用；?

再稱取Boc-Thr(Bzl)-OH3.6g，用30ml四氫呋喃溶解，加入1.17ml的N-甲基嗎啉，在冰鹽浴-15℃下，攪拌下緩慢滴加1.51ml的氯甲酸異丁酯，2-4分鐘后，加入在冰箱預冷至0℃以下的Phe-Thr(Bzl)-Ser(Bzl)-Cys(MeOBzl)-OBzl的四氫呋喃溶液，維持在-15℃反應30分鐘后撤去冰鹽浴，恢復室溫反應，反應結束，過濾除去鹽，濃縮濾液，殘留物溶于乙酸乙酯，用5％NaOH、水、5％HCl、水、飽和食鹽水依次洗滌后，用無水NaSO₄ 干燥，濃縮減壓去溶劑，得到白色固體為五肽Boc-Thr(Bzl)-Phe-Thr(Bzl)-Ser(Bzl)-Cys(MeOBzl)-OBzl；?

將得到的五肽化合物12.2g倒入圓底燒瓶中，加入10ml二氯甲烷，冷卻至0℃以下，加入10ml三氟乙酸，加完后恢復室溫反應，結束后，將反應液分次倒入到100-150ml冰箱預冷至0℃以下的無水乙醚中，析出白色固體，過濾，再用異丙醇結晶得片段I：TFA·Thr(Bzl)-Phe?-Thr(Bzl)-Ser(Bzl)-Cys(MeOBzl)-OBzl；?

b.片段II：Boc-Phe-Trp-Lys(Z)-OH的合成：?

將8.3g?Boc-Trp-OH溶于55ml四氫呋喃中，加入3ml?N-甲基嗎啉，冰鹽浴冷卻至-15℃攪拌下，緩慢滴加3.55ml氯甲酸異丁酯，2-4分鐘后，加入預冷至0℃以下的溶有9gHCl·Lys(Z)-OMe和3ml的N-甲基嗎啉的50ml?N，N-二甲基甲酰胺溶液，維持在-15℃溫反應30分鐘，撤去冰鹽浴，恢復室溫反應，反應結束后過濾除去鹽，濃縮濾液，殘留物溶于乙酸?乙酯，用5％NaOH、水、5％HCl、水、飽和食鹽水依次洗滌后，用無水NaSO₄ 干燥，濃縮減壓去溶劑，得到的白色固體用乙酸乙酯和石油醚結晶，得到Boc-Trp-Lys(Z)-OMe；?

將得到Boc-Trp-Lys(Z)-OMe15.1g倒入圓底燒瓶，加20ml二氯甲烷，苯甲醚4.2ml，巰基乙醇2.7ml，充氬氣保護，冷卻至0℃以下，加入20ml的三氟乙酸，加完后恢復至室溫反應，反應結束后，減壓濃縮，殘余物用乙酸乙酯溶解，用5％NaOH洗至溶液中性，飽和食鹽水洗，干燥，過濾，濃縮得油狀物為Trp-Lys(Z)-OMe，將該油狀物用40ml四氫呋喃溶解，放置冰箱預冷至0℃以下備用，再稱取Boc-Phe-OH6.8g用50ml四氫呋喃溶解，加入2.82ml的N-甲基嗎啉，冰鹽浴冷卻至-15℃攪拌下，緩慢滴加3.33ml氯甲酸異丁酯，2-4分鐘后，加入預冷至0℃以下的Trp-Lys(Z)-OMe四氫呋喃溶液，維持在-15℃反應30分鐘后撤去冰鹽浴，恢復室溫反應，反應結束后過濾除去鹽，濃縮濾液，殘留物溶于乙酸乙酯，用5％NaOH、水、5％HCl、水、飽和食鹽水依次洗滌后，用無水NaSO₄ 干燥，濃縮減壓去溶劑，得到的固體用乙酸乙酯和石油醚結晶得Boc-Phe-Trp-Lys(Z)-OMe17.2g，再將其用50ml的N，N-二甲基甲酰胺溶解，0℃滴加2N?NaOH25ml進行皂化反應，反應結束，反應液倒入200ml冰水中，用酸調至pH＝2-3，用乙酸乙酯萃取，有機相用水洗至中性，飽和食鹽水洗，干燥，濃縮得白色固體為片段II：Boc-Phe-Trp-Lys(Z)-OH；?

c.片段III：Boc-Asn-Phe-OH的合成?

稱取Boc-Asn-OH12.028g，1-羥基苯并三唑(HOBt)14g，用100ml?N，N-二甲基甲酰胺溶解，在冰浴冷卻至0℃攪拌下滴加入溶有7.2g?N，N′-二異丙基碳二亞胺(DIC)的10ml?N，N-二甲基甲酰胺溶液，再恢復室溫反應，反應結束后將反應液再降至0℃以下，在其中加入預冷至0℃以下的溶有苯丙氨酸甲酯鹽酸鹽(HCl·Phe-OMe)12.278g和N-甲基嗎啉6.27ml的100ml?N，N-二甲基甲酰胺溶液，維持在0℃攪拌一小時后，恢復室溫反應至反應結束，將反應液倒入300-400ml水中，析出大量固體，濾出的固體用乙醚洗滌后將固體干燥處理，再將該固體19.9g溶于200ml的N，N-二甲基甲酰胺中，0℃滴加2N?NaOH50ml進行反應，反應結束，將反應液倒入500ml冰水中，加酸調至pH＝2-3，析出大量固體，抽濾，用水洗至中性，收集固體，晾干，用異丙醇和石油醚重結晶得白色固體為片段III：Boc-Asn-Phe-OH；?

d.片段IV：Boc-Ala-Gly-Cys(MeOBzl)-Lys(Z)-OH的合成?

將9.1g?Boc-Cys(MeOBzl)-OH溶于50ml四氫呋喃中，加3mlN-甲基嗎啉，冰鹽浴冷卻至-15℃，攪拌下緩慢滴加3.46ml氯甲酸異丁酯，2-4分鐘后，加入預冷至0℃以下的溶有8gHCl·Lys(Z)-OMe和2.7ml?N-甲基嗎啉的40ml?N，N-二甲基甲酰胺溶液，維持在-15℃下反應30分鐘后撤去冰浴，恢復室溫反應，反應結束后過濾除去鹽，濃縮濾液，殘留物溶于乙酸乙?酯，用5％NaOH、水、5％HCl、水、飽和食鹽水依次洗滌后，有機相用無水NaSO₄ 干燥，濃縮減壓去溶劑，得到的白色固體用乙酸乙酯和石油醚結晶，得到Boc-Cys(MeOBzl)-Lys(Z)-OMe；?

將得到Boc-Cys(MeOBzl)-Lys(Z)-OMe13.6g倒入圓底燒瓶，加入15ml二氯甲烷，冷卻至0℃以下，加入15ml三氟乙酸，加完恢復室溫反應，反應結束后，減壓濃縮，殘余物用乙酸乙酯溶解，用5％NaOH洗至溶液中性，飽和食鹽水洗，干燥，過濾，濃縮得油狀物為Cys(MeOBzl)-Lys(Z)-OMe，該油狀物用40ml四氫呋喃溶解，放置冰箱預冷至0℃以下備用，將3.85g的Boc-Gly-OH溶于50ml的四氫呋喃中，加2.42ml?N-甲基嗎啉，冰鹽浴冷卻，在-15℃攪拌下，緩慢滴加2.9ml氯甲酸異丁酯，2-4分鐘后，加入預冷至0℃以下溶有Cys(MeOBzl)-Lys(Z)-Ome的四氫呋喃溶液，維持在-15℃反應30分鐘，撤去冰鹽浴，恢復室溫反應，反應結束后過濾除去鹽，濃縮濾液，殘留物溶于乙酸乙酯，用5％NaOH、水、5％HCl、水、飽和食鹽水依次洗滌后，用無水NaSO₄ 干燥，濃縮減壓蒸去溶劑，得到的固體用乙酸乙酯和石油醚結晶得Boc-Gly-Cys(MeOBzl)-Lys(Z)-OMe；?

將得到Boc-Gly-Cys(MeOBzl)-Lys(Z)-OMe13.9g倒入圓底燒瓶，加入15ml二氯甲烷，冷卻至0℃以下，加入15ml三氟乙酸，加完后恢復反應體系到室溫反應，反應結束后，減壓濃縮，殘余物用乙酸乙酯溶解，用5％NaOH洗至溶液中性，飽和食鹽水洗，干燥，過濾，濃縮得油狀物為Gly-Cys(MeOBzl)-Lys(Z)-OMe，該油狀物40ml四氫呋喃溶解，放置冰箱預冷至0℃以下備用，將3.9gBoc-Ala-OH溶于50ml四氫呋喃中，加2.3ml?N-甲基嗎啉，冰鹽浴冷卻，在-15℃攪拌下，緩慢滴加2.7ml氯甲酸異丁酯，2-4分鐘后，加入預冷至0℃以下溶有Gly-Cys(MeOBzl)-Lys(Z)-Ome的四氫呋喃溶液，維持在-15℃反應30分鐘，撤去冰鹽浴，恢復室溫反應，反應結束后過濾除去鹽，濃縮濾液，殘留物溶于乙酸乙酯，用5％NaOH、水、5％HCl、水、飽和食鹽水依次洗滌后，用無水NaSO₄ 干燥，濃縮減壓去溶劑，得到的固體用乙酸乙酯和石油醚結晶得Boc-Ala-Gly-Cys(MeOBzl)-Lys(Z)-OMe14.3g，將得到該四肽用100ml?N，N-二甲基甲酰胺溶解，加入2N的NaOH20ml進行皂化反應，反應結束后反應液倒入300ml水中，用酸調至pH＝2-3，用乙酸乙酯萃取，有機相用水洗至中性，飽和食鹽水洗，干燥，濃縮得白色固體為片段IV：Boc-Ala-Gly-Cys(MeOBzl)-Lys(Z)-OH；?

B.片段縮合?

a.八肽化合物V：Boc-Phe-Trp-Lys(Z)-Thr(Bzl)-Phe-Thr(Bzl)-Ser(Bzl)-Cys(MeOBzl)-OBzl?的合成?

稱取Boc-Phe-Trp-Lys(Z)-OH3.0g，1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽1.2g，1-羥?基苯并三唑1.13g，用30ml?N，N-二甲基甲酰胺溶解，冰浴降至0℃，加0.7ml?N-甲基嗎啉，反應液維持在0℃攪拌30分鐘，再恢復室溫攪拌30分鐘，然后將反應液再次降至0℃，加入預冷至0℃以下的溶有3.2g?TFA·Thr(Bzl)-Phe-Thr(Bzl)-Ser(Bzl)-Cys(MBzl)-OBzl和0.33ml?N-甲基嗎啉的20ml的N，N-二甲基甲酰胺溶液，此混合液維持0℃攪拌30分鐘后，再恢復室溫反應，反應結束后，將反應液直接倒入200ml水中，析出大量白色固體，抽濾，濾餅用水洗后，再用甲醇洗，乙醚洗，晾干，得到八肽化合物Boc-Phe-Trp-Lys(Z)-Thr(Bzl)-Phe-Thr(BZl)-Ser(Bzl)-Cys(MeOBzl)-OBzl；?

b.十肽化合物VI：Boc-Asn-Phe-Phe-Trp-Lys(Z)-Thr(Bzl)-Phe-Thr(Bzl)-Ser(Bzl)-Cys(MeO?Bzl)-OBzl的合成?

稱取上步得到的八肽化合物V4.5g，加二氯甲烷5ml，苯甲醚0.84ml，巰基乙醇0.35ml，充氬氣保護，浸泡15分鐘后，降至0℃以下加入5ml三氟乙酸，維持0℃攪拌10分鐘后，再恢復室溫反應至TLC檢測結束，減壓抽干二氯甲烷，殘余液倒入冷的乙醚，析出固體，抽濾，濾餅用乙醚洗，晾干，得到八肽化合物V的三氟乙酸鹽TFA·Phe-Trp-Lys(Z)-Thr(Bzl)-Phe?-Thr(Bzl)-Ser(Bzl)-Cys(MeOBzl)-OBzl?4.49g，將該三氟乙酸鹽用30ml的N，N-二甲基甲酰胺溶解，再加N-甲基嗎啉0.31ml，室溫攪拌30分鐘后放置冰箱預冷至0℃以下備用，稱取Boc-Asn-Phe-OH1.46g，1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽EDCI1.1g，1-羥基苯并三唑(HOBt)1.05g，用30ml的N，N-二甲基甲酰胺溶解后降溫至0℃，加0.6ml的N-甲基嗎啉NMM，反應液維持在0℃攪拌30分鐘，再恢復室溫攪拌30分鐘，然后將反應液再次將至0℃，加入預冷至0℃以下的溶有Phe-Trp-Lys(Z)-Thr(Bzl)-Phe-Thr(Bzl)-Ser(Bzl)-Cys(MeOBzl)-OBzl的N，N-二甲基甲酰胺溶液，將混合液維持在0℃攪拌30分鐘，再恢復室溫反應，反應結束后，將反應液直接倒入200ml水中，析出大量白色固體，濾出固體后將濾餅用水洗后，再用甲醇洗，乙醚洗，晾干，得到十肽化合物VIBoc-Asn-Phe-Phe-Trp-Lys(Z)-Thr?(Bzl)-Phe-Thr(Bzl)-Ser(Bzl)-Cys(MeOBzl)-OBzl；?

c.十四肽化合物VII：Boc-Ala-Gly-Cys(MeOBzl)-Lys(Z)-Asn-Phe-Phe-Trp-Lys(Z)-Thr(Bzl)?-Phe-Thr(Bzl)-Ser(Bzl)-Cys(MeOBzl)-OBzl的合成?

稱取上步得到的十肽化合物VI4.8g，加二氯甲烷4ml，苯甲醚0.78ml，巰基乙醇0.33ml，充氬氣保護，浸泡15分鐘后，降至0℃以下加入4ml三氟乙酸，維持0℃攪拌10分鐘后，再恢復室溫反應至反應結束，減壓抽干二氯甲烷，殘余液倒入冷的乙醚，析出固體，抽濾，濾餅用乙醚洗滌后晾干，得到十肽化合物VI的三氟乙酸鹽TFA·Asn-Phe-Phe-Trp-Lys(Z)-Thr?(Bzl)-Phe-Thr(Bzl)-Ser(Bzl)-Cys(MOBzl)-OBzl，將該三氟乙酸鹽用40ml的N，N-二甲基甲酰胺?溶解，再在其中加入0.28ml的N-甲基嗎啉，室溫攪拌30分鐘，置入冰箱冷凍至0℃以下備用，稱取Boc-Ala-Gly-Cys(MOBzl)-Lys(Z)-OH2.58g，1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽1.0g，1-羥基苯并三唑(HOBt)0.95g，用30ml的N，N-二甲基甲酰胺溶解，降溫至0℃，加入0.58ml的N-甲基嗎啉，反應液維持0℃攪拌30分鐘，再恢復室溫攪拌30分鐘，然后將反應液再次將至0℃，加入預冷至0℃以下溶有Asn-Phe-Phe-Trp-Lys(Z)-Thr(Bzl)-Phe-Thr(Bzl)-Ser?(Bzl)-Cys(MOBzl)-OBzl的N，N-二甲基甲酰胺溶液 ，將此混合液維持0℃攪拌30分鐘，再恢復室溫反應，反應結束后將反應液直接倒入200ml水中，析出大量白色固體，濾出固體后將濾餅用水洗后，再用甲醇洗，乙醚洗，晾干，得到生長抑素全保護的線性肽化合物，也就是十四肽化合物VII：Boc-Ala-Gly-Cys(MeOBzl)-Lys(Z)-Asn-Phe-Phe-Trp-Lys(Z)-Thr(Bzl)-Phe-Thr?(Bzl)-Ser(Bzl)-Cys(MeOBzl)-OBzl；?

C.還原性生長抑素的合成?

稱取合成的生長抑素全保護的線性肽化合物VII2g，加苯甲醚6.6ml，沖氬氣保護，冰浴冷卻至0℃，加5mmol/mL的CF₃SO₃H的三氟乙酸溶液12ml，維持0℃反應1小時后，反應液中加入100ml預冷至0℃以下的無水乙醚，即析出大量白色固體，過濾，收集固體，真空干燥，得生長抑素粗品；?

D.將得到的線性粗肽按0.08-0.1mg/ml進行室溫氧化環合，通入氧氣或空氣自然氧化，pH調至7.5-8.0，攪拌2-3天，凍干得生長抑素粗品，將粗品溶入水中，過濾，濾液分批經C18制備柱純化，純化條件為：流動相為含有0.1％三氟乙酸的乙腈和含有0.1％三氟乙酸的水，采用梯度洗脫，檢測波長：280nm，收集樣品洗脫液凍干后，獲得精品生長抑素。?