[發明專利]一種新型畜用肽苗及其制備方法

無效

• 申請號: 200910136654.6
• 申請日: 2009-05-12
• 公開（公告）號: CN101579522A
• 公開（公告）日: 2009-11-18
• 發明（設計）人: 陶鈺;邵國虎
• 申請（專利權）人: 陶鈺;邵國虎
• 主分類號: A61K39/135
• 分類號: A61K39/135;A61K38/16;A61P31/14;C07K14/09;C07K1/16;C07K1/12;C07K1/06;C07K1/04
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技術領域

本發明涉及一種獸用口蹄疫化學合成肽疫苗及其制備方法。?

背景技術

口蹄疫(foot?and?mouth?disease，簡稱FMD)是偶蹄動物的一種高度接觸性、發熱性、急性傳染病，在世界各國普遍分布。其傳播迅速，感染馬、牛，豬，羊等牲畜，導致幼畜死亡，成年動物生產能力急劇下降，嚴重危害畜牧業的發展和肉食及其畜產品的生產和供應，給流行國家和地區畜牧業生產造成巨大的經濟損失。目前，口蹄疫在許多國家已經被消滅或很好地被控制，然而近幾年，它再度給養殖業帶來巨大的經濟損失。1997年我國臺灣口蹄疫大爆發，殃及600多個豬場，2000年在俄羅斯爆發造成了巨大的經濟損失。2001年2月在英國的爆發和流行，給英國養殖業造成了繼瘋牛病和豬瘟兩大疫情損害后的又一次沉重打擊，其影響甚至擴展到整個歐洲。在我國，A型FMDV、O型FMDV、AsiaI型FMDV都有發生，AsiaI型FMDV在歷史上僅局限于我國云南邊境地區流行，但在2004-2006年先后在我國新疆、甘肅、江蘇、北京、河南等地爆發了AsiaI型口蹄疫，嚴重影響當地畜牧業的發展。?

口蹄疫病毒(FMDV)屬于細小核糖核酸病毒，該屬的病毒具有多型性、易變性等特點。全世界有A、O、C、Sat1、Sat2、Sat3和AsiaI7個血清型，亞型有70多個，各血清型間不存在交叉免疫，且病毒易發生變異，這就為FMD的防治造成了很大困難。目前，我國對口蹄疫實行強制性免疫，疫苗免疫是防治口蹄疫的主要手段。而我國現行使用的口蹄疫疫苗主要是病毒滅活疫苗，但滅活卻存在許多隱患，如疫苗生產過程中由于不慎易引起病毒的逃逸以及滅活不完全而導致FMD的再度暴發，不同型的毒株間不能提供有效保護等。目前世界上很多國家已經停止使用滅活疫苗，也禁止從使用滅活疫苗的國家進口畜產品。為了克服滅活疫苗的自身不足，FMD各種新型疫苗如可飼基因工程疫苗、蛋白質載體疫苗、基因缺失疫苗、活載體疫苗、核酸疫苗、合成肽疫苗等不斷涌現，但是其在安全性、免疫效果、工藝方面都存在諸多問題，影?響了這些新型疫苗的使用。?

研究表明：口蹄疫病毒衣殼蛋白由四種結構蛋白VP1、VP2、VP3和VP4各60個組成，VP1-VP3位于衣殼蛋白的外側，組成衣殼蛋白亞單位，而VP4位于病毒顆粒的內部。VP1是主要的保護性抗原，其上含有FMDV主要抗原結合位點能誘導機體產生中和抗體，研究表明，位于VP1第134-158氨基酸之間的G-H環，C端第200-213氨基酸殘基是誘導中和抗體的主要免疫抗原位點。在本發明中，選擇了O型、A型和AsiaI型FMDV結構蛋白VP1上第130-168位的優勢B細胞表位。同時由于口蹄疫主要以體液免疫為主，有效的疫苗應該能誘導以Th2為主導的免疫反應。DiMarchi等曾報道，將串聯有FMDV?VP1第140-160和第200-213氨基酸殘基的合成肽免疫牛后，動物能抵抗病毒的感染。但隨后的研究證實，當將此類合成肽疫苗在易感動物群內大規模使用時，卻僅能提供有限的保護。究其原因，強效T細胞表位的缺乏可能是影響該疫苗效果的一個因素。同時攜帶B細胞抗原表位和T細胞抗原表位的串聯肽已經被證明對牛表現出良好的免疫反應性。研究證實，在FMDV衣殼蛋白上有多個能被牛和豬淋巴細胞識別的T細胞表位，但對這些T細胞表位的識別明顯地受到了宿主MHC多態性的限制，進而也限制了它們在疫苗中的應用。同時研究發現，內源性的T細胞表位不足以刺激易感動物免疫系統對口蹄疫病毒產生有效的保護。所以，提供強效的外源T細胞表位以輔助增強易感動物的免疫應答是研究高效肽苗的關鍵。?

發明內容

因此，本發明的目的是提供一種能抵抗口蹄疫病毒感染的肽疫苗。?

本發明的另一個目的是提供一種生產上述肽疫苗的方法。?

為實現上述目的，本發明采用了以下技術方案：?

本發明提供一種抗口蹄疫病毒的肽疫苗，其特征在于肽抗原具有如SEQ?ID?NO：1、SEQ?ID?NO：2所示的氨基酸序列。?

在對口蹄疫病毒抗原表位充分了解的基礎上，通過試驗動物篩選得到口蹄疫病毒的優勢B細胞抗原表位及其最佳組合方式，進而通過大量?試驗室試驗在小反芻獸疫病毒上找到了一段能增強口蹄疫VP1上優勢B細胞表位的強效外源T細胞表位，然后通過一定的接頭氨基酸將強效外源T細胞表位和優勢B細胞表位連接，構建了含輔助性強效外源T細胞表位和FMDV主要抗原表位基因的多肽疫苗，并通過計算機模擬完全符合設計要求。?

上述的肽苗，其可以采用化學合成的方法制備合成肽抗原。?

本發明還提供了該肽疫苗的制備方法，主要包括以下步驟：?