[發明專利]一種用于基因治療的新型細胞特異性內含microRNA結合序列的基因HAAVmir

無效

• 申請號: 200910136134.5
• 申請日: 2009-04-30
• 公開（公告）號: CN101532024A
• 公開（公告）日: 2009-09-16
• 發明（設計）人: 許瑞安;肖衛東;陸暉
• 申請（專利權）人: 許瑞安;肖衛東;陸暉
• 主分類號: C12N15/33
• 分類號: C12N15/33;C12N15/34;C12N15/48;C12N15/86;C12N15/861;C12N15/867;A61K48/00;C12R1/93
• 代理公司: 北京華科聯合專利事務所
• 代理人: 楊 厚;王 為

1、一種新型基因片段HAAVmir，其特征是所說基因片段是由重組腺病毒載體輔助質粒非結構基因復制區、結構基因包裝蛋白基因和細胞靶向特異性microRNA序列組成，其可作為輔助質粒制備重組病毒載體，并在基因治療應用中從源頭徹底消除病毒載體衣殼蛋白復制與合成以及清除其污染蛋白。

2、權利要求1所述的基因片段AAVmir，其特征是重組病毒載體輔助質粒非結構基因復制區，選自AAV1型，AAV2型，AAV4型，AAV5型，AAV8型，AAV9或其他AAV非結構基因的AAV?rep基因。

3、權利要求1所述的基因片段AAVmir，其特征是重組病毒載體輔助質粒病毒結構基因包裝蛋白，選自AAV病毒包裝蛋白基因，腺病毒蛋白基因，慢病毒蛋白基因或其它病毒蛋白包裝基因。

4、權利要求1所述的基因片段AAVmir，其特征是細胞靶向性microRNA序列，選自肝細胞靶向性、肺細胞靶向性、造血細胞靶向性，或其他細胞靶向性的microRNA，如由4個拷貝肝靶向性的hsa-mir-122microRNA(序列為：TGGAGTGTGACAATGGTGTTTG)和4個拷貝造血細胞特異靶向性的has-mir-142-3p?microRNA(序列為：TGTAGTGT?TTCCTACTTT?ATGGA)組成，也適用于構建其他器官細胞靶向性的microRNA。

5、權利要求1所述基因片段AAVmir輔助質粒的重組腺相關病毒載體，是將基因片段AAVmir、病毒復制功能輔助質粒和病毒載體以1：1：1比例共轉染到HEK293細胞，轉染72小時后收集細胞，細胞裂解液中的重組腺相關病毒載體經由兩次氯化銫超速離心獲得。

6、權利要求6所述重組腺病毒載體，其中病毒載體可以是AAV病毒載體，腺病毒載體，慢病毒載體，其他病毒載體以及復合型或嵌合性的病毒載體。

7、權利要求6或7所述的重組腺相關病毒載體，其中AAV病毒載體可以是AAV1，AAV2，AAV4，AAV5，其他類型的AAV病毒載體以及復合型或嵌合型的AAV病毒載體。

8、權利要求1所述的基因片段AAVmir，其可直接應用于細胞株。

9、權利要求1或9所述的基因片段AAVmir，其細胞株選自肝細胞株，肺細胞株，肌肉細胞株，神經元細胞株，干細胞株或其他細胞株。

10、權利要求1所述的基因片段AAVmir重組腺病毒載體以及復合型或嵌合型的AAV病毒載體在制備分子藥物和基因治療中的應用。