[發(fā)明專利]一種日本血吸蟲蟲卵抗體磁微粒分離酶聯(lián)免疫檢測(cè)方法

無效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 200910131610.4
• 申請(qǐng)日: 2009-04-10
• 公開（公告）號(hào): CN101533011A
• 公開（公告）日: 2009-09-16
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 陳立杰;黃進(jìn);仝文斌;姜昌富;姚藍(lán);雷焱;朱世偉
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 北京倍愛康生物技術(shù)有限公司
• 主分類號(hào): G01N33/543
• 分類號(hào): G01N33/543;G01N21/31
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于免疫檢測(cè)分析技術(shù)領(lǐng)域，涉及一種人畜共患傳染病的免疫檢測(cè)分析技術(shù)，特別提供了一種快速檢測(cè)日本血吸蟲蟲卵抗體的磁微粒分離酶聯(lián)免疫檢測(cè)方法，適用于人畜日本血吸蟲蟲卵抗體的定性檢測(cè)。

背景技術(shù)

目前，我國長江中下游地區(qū)血吸蟲病仍然嚴(yán)重流行，現(xiàn)有81萬血吸蟲病人，6萬頭血吸蟲病牛。6千萬人暴露在感染危險(xiǎn)之中，急性感染不斷發(fā)生。盡管我國利用人畜同步化療等措施在控制血吸蟲病上取得了很大的成功，但目前血吸蟲病仍然是我國長江中下游地區(qū)的一個(gè)重要的公共衛(wèi)生問題^[1]。

傳統(tǒng)上，用患者糞便中日本血吸蟲蟲卵的病原學(xué)方法檢測(cè)血吸蟲病，但是該方法費(fèi)時(shí)、費(fèi)力，漏檢率高，而且不能對(duì)該病做出早期診斷。自20世紀(jì)80年代以來，免疫檢測(cè)的方法逐漸被用于血吸蟲病的診斷，并取得了良好的效果。

血吸蟲病的免疫檢測(cè)中，蟲卵抗體是最常用的檢測(cè)物質(zhì)，如果在人畜血液中檢出日本血吸蟲抗體，則可推斷人畜患有或曾經(jīng)患有血吸蟲病。目前，比較先進(jìn)和常用的免疫學(xué)檢測(cè)方法是間接酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(間接ELISA)。該方法以日本血吸蟲可溶性蟲卵抗原(Schistosomajaponicum?Soluble?Egg?Antigen，Sj-SEA)包被的酶標(biāo)板為固相分離載體，以生物酶標(biāo)記的抗人或畜二抗為酶標(biāo)試劑，定性檢測(cè)人畜血清或血漿中的日本血吸蟲蟲卵抗體。該方法操作簡單、靈敏度高、準(zhǔn)確性好，因此得到日益廣泛的應(yīng)用。但是該方法也存在一些缺點(diǎn)；①該方法僅能檢測(cè)單一亞類的抗體。例如，檢測(cè)IgG抗體的試劑盒就不能檢測(cè)IgM、IgA等抗體。由于血吸蟲病早期感染階段可能僅存在IgM抗體，所以存在一定的漏診現(xiàn)象；②由于采用的生物酶標(biāo)記的抗人或畜二抗只能與人或畜的抗體特異結(jié)合，所以每種試劑盒只能針對(duì)人或畜，不能通用。③待測(cè)血清樣本往往需要預(yù)先稀釋，增加了操作的復(fù)雜性。

磁微粒分離酶聯(lián)免疫檢測(cè)技術(shù)是一種以磁性微粒為固相分離載體，將免疫磁微粒分離技術(shù)與ELISA技術(shù)相結(jié)合而建立的一種新型免疫檢測(cè)方法。傳統(tǒng)ELISA方法中，抗原、抗體的結(jié)合反應(yīng)是在固相(ELISA板反應(yīng)孔)表面進(jìn)行的，而在磁微粒分離酶聯(lián)免疫檢測(cè)中，磁微粒混懸在液相中，抗原、抗體的結(jié)合反應(yīng)也在近似液相的條件下進(jìn)行，因而反應(yīng)快速、徹底，與傳統(tǒng)ELISA相比具有靈敏度高，檢測(cè)時(shí)間短的優(yōu)點(diǎn)。

雙抗原夾心法是一種用于檢測(cè)抗體的方法，其檢測(cè)原理是；待測(cè)抗體首先與連接在固相表面的抗原結(jié)合，然后加入生物酶標(biāo)記的抗原。由于抗體具有兩個(gè)抗原結(jié)合位點(diǎn)，可以分別與固相抗原和生物酶標(biāo)記抗原結(jié)合，通過生物酶催化的顯色或發(fā)光反應(yīng)可以達(dá)到檢測(cè)抗體的目的。目前，該方法已經(jīng)成功用于諸如乙型肝炎表面抗體等的檢測(cè)。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于提供一種具有靈敏度高、特異性好、適用性廣、操作簡便和節(jié)省檢測(cè)時(shí)間的檢測(cè)日本血吸蟲蟲卵抗體的磁微粒分離酶聯(lián)免疫檢測(cè)方法。

所述的日本血吸蟲蟲卵抗體磁微粒分離酶聯(lián)免疫檢測(cè)方法的試劑組成包括：①磁分離試劑(結(jié)合有Sj-SEA的磁微粒混懸液)；②酶標(biāo)試劑(偶聯(lián)有生物酶的Sj-SEA溶液)；③清洗液；④陽性質(zhì)控品(含有一定量抗Sj-SEA抗體的血清)；⑤陰性質(zhì)控品(不含抗Sj-SEA抗體的血清)；⑥底物溶液(生物酶催化的顯色或發(fā)光底物)。

所述的日本血吸蟲蟲卵抗體磁微粒分離酶聯(lián)免疫檢測(cè)方法的檢測(cè)操作方法如下：

(1)加樣與免疫反應(yīng)：在試管中加入5-100μL血清樣本、陽性質(zhì)控品或陰性質(zhì)控品，然后加入20-100μL，0.1-10mg/mL的磁分離試劑，混勻后，37℃溫育5-30分鐘；

(2)洗滌：使磁微粒在磁場(chǎng)中沉降，去上清，加入100-500μL清洗液，去除磁場(chǎng)，震蕩使磁微粒充分混懸30秒，然后再次使磁微粒在磁場(chǎng)中沉降，去除上清液。如此重復(fù)2-4次；

(3)加入酶標(biāo)試劑：在每一試管中加入生物酶標(biāo)記的SEA工作溶液30-120μL，混勻后，37℃溫育5-30分鐘；

(4)洗滌：使磁微粒在磁場(chǎng)中沉降，去上清，加入100-500μL清洗液，去除磁場(chǎng)，震蕩使磁微粒充分混懸30秒，然后再次使磁微粒在磁場(chǎng)中沉降，去除上清液。如此重復(fù)2-4次；

(5)加底物溶液：每管加入50-300μL生物酶催化的顯色或發(fā)光底物，混勻后，37℃溫育5-30分鐘；

(6)終止顯色：每管加入300μL終止液，并放在磁分離器上分離10分鐘；

(7)讀值：在分光光度計(jì)或發(fā)光強(qiáng)度檢測(cè)儀上讀取吸光度或發(fā)光強(qiáng)度值；