[發明專利]一種日本血吸蟲蟲卵抗體磁微粒分離酶聯免疫檢測方法

無效

• 申請號: 200910131610.4
• 申請日: 2009-04-10
• 公開（公告）號: CN101533011A
• 公開（公告）日: 2009-09-16
• 發明（設計）人: 陳立杰;黃進;仝文斌;姜昌富;姚藍;雷焱;朱世偉
• 申請（專利權）人: 北京倍愛康生物技術有限公司
• 主分類號: G01N33/543
• 分類號: G01N33/543;G01N21/31
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1、一種日本血吸蟲蟲卵抗體磁微粒分離酶聯免疫方法，其特征在于檢測步驟為：

(1)加樣與免疫反應：在試管中加入5-100μL血清樣本、陽性質控品或陰性質控品，然后加入20-100μL，0.1-10mg/mL的磁分離試劑，混勻后，37℃溫育5-30分鐘；

(2)洗滌：使磁微粒在磁場中沉降，去上清，加入100-500μL清洗液，去除磁場，震蕩使磁微粒充分混懸30秒，然后再次使磁微粒在磁場中沉降，去除上清液。如此重復2-4次。

(3)加入酶標試劑：在每一試管中加入生物酶標記的日本血吸蟲可溶性蟲卵抗原(Schistosoma?japonicum?soluble?egg?antigen，Sj-SEA)工作溶液30-120μL，混勻后，37℃溫育5-30分鐘；

(4)洗滌：使磁微粒在磁場中沉降，去上清，加入100-500μL清洗液，去除磁場，震蕩使磁微粒充分混懸30秒，然后再次使磁微粒在磁場中沉降，去除上清液。如此重復2-4次。

(5)加底物溶液：每管加入50-300μL生物酶催化的顯色或發光底物，混勻后，37℃溫育5-30分鐘。

(6)終止顯色(僅適用于顯色法)：每管加入100-300μL終止液，并放在磁分離器上分離10分鐘；

(7)讀值：在分光光度計或發光強度檢測儀上讀取吸光度或發光強度值。

2、根據權利要求1所述的磁分離試劑，其特征在于：是日本血吸蟲可溶性蟲卵抗原(Sj-SEA)與磁微粒的連接物，并進一步混懸在緩沖液中的混懸液。所述的磁微粒直徑在0.1-5.0μm之間，具有超順磁性和磁場響應性，表面含有氨基(NH2-)或羧基(COOH-)活性基團。所述的Sj-SEA與磁微粒的連接可以通過化學交聯劑，如戊二醛、1-ethyl-3-[3-dimethylaminopropyl]carbodiimide?hydrochloride(EDC)等以共價鍵的形式，也可以通過物理吸附(靜電作用、離子鍵或疏水作用等)的形式。其工作濃度為0.25-8mg/ml。

3、根據權利要求1所述的酶標試劑，其特征在于：是Sj-SEA與生物酶的連接物，并溶解在緩沖液中的溶液。所述的生物酶可以是辣根過氧化物酶(HRP)，也可以是堿性磷酸酶(ALP)。生物酶與Sj-SEA的連接方法可以通過過碘酸鈉氧化法、戊二醛法或Succinimidyl4-(N-maleimidomethyl)cyclohexane-1-carboxylate(SMCC)、2-Iminothiolane·HCl(2IT)交聯法等多種方法。其工作濃度為0.5-5μg/mL。