[發明專利]極細枝孢霉生物合成茶黃素粗提物的方法無效
| 申請號： | 200910129072.5 | 申請日： | 2009-03-20 |
| 公開（公告）號： | CN101565724A | 公開（公告）日： | 2009-10-28 |
| 發明（設計）人： | 傅冬和;趙淑娟;劉仲華 | 申請（專利權）人： | 湖南農業大學 |
| 主分類號： | C12P17/16 | 分類號： | C12P17/16;C12R1/645 |
| 代理公司： | 長沙正奇專利事務所有限責任公司 | 代理人： | 何 為 |
| 地址： | 410128湖南*** | 國省代碼： | 湖南;43 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 細枝 生物 合成 黃素 粗提物 方法 | ||
1.一種利用極細枝孢霉產生的多酚氧化酶生物合成茶黃素粗提物的方法，其特征在于：包括如下步驟：
(1)、多酚氧化酶粗酶液的制備：
a、先培養出極細枝孢霉(Cladosporium?tenuissimum)CGMCCNO.2891；
b、菌種的擴大培養：
將a步驟中純化菌種轉接種至每10.0ml的PDA含有0.02g大葉種茶兒茶素的液體培養基中，于22-25℃下，以轉速為110-130r/min恒溫振蕩培養4天；
c、發酵培養基的配制：
配制馬鈴薯200g/L、葡萄糖5g/L、NH4NO3?3g/L、純度大于70％的大葉種茶兒茶素3g/L、CuSO4?0.1mmol/L、FeSO4?0.1mmol/L的液體發酵培養基，培養液體積為容器總體積的50-65％，pH為4.5-5.6，于121℃條件下滅菌20min；
d、菌種的接種與發酵：
取b步驟中帶有菌株的擴大培養基接種到c步驟中的發酵培養基中，接種量為擴大培養基∶發酵培養基的體積比為4-7∶93-96，于22-25、轉速為110-130r/min恒溫振蕩培養4天；
e、制備粗酶液：
取上述發酵培養液，用4層干凈紗布過濾菌絲體，然后于3-5℃下，以離心轉速為7800-8200r/min離25-35min后，取上清液作為粗酶液；
(2)、酶促氧化兒茶素制備茶黃素：
取上述粗酶液，按每100ml粗酶液加入純度大于70％的兒茶素2.0g，于溫度為22-25℃、pH為4.5-5.6的條件下通入氧氣以不產生大量氣泡為宜，反應40-50分鐘，將反應液用膜過濾濃縮冷凍干燥即得茶黃素粗制品。
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