[發(fā)明專利]一種利用動物肝臟微粒體酶生物合成7-脫氫膽固醇的方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 200910113920.3
• 申請日: 2009-03-17
• 公開（公告）號: CN101575633A
• 公開（公告）日: 2009-11-11
• 發(fā)明（設計）人: 黃時海;李湘萍;夏小斌;吳孔陽;陳桂光;梁智群;張云開;李燦明;汪晟;康超;何鑫平
• 申請（專利權）人: 廣西大學
• 主分類號: C12P33/00
• 分類號: C12P33/00;C12P33/02
• 代理公司: 廣西南寧公平專利事務所有限責任公司
• 代理人: 黃永校

1.一種利用動物肝臟微粒體酶生物合成7-脫氫膽固醇的方法，其特征在于，該方法包括以下步驟：

1.1微粒體酶液的制備

將50g切成塊狀的新鮮豬肝臟放入pH?5、0.01mol/L的谷胱甘肽磷酸緩沖溶液中，在4℃條件下用組織勻漿機勻漿，兩層紗布過濾，濾液置于超聲波細胞破碎儀中，處理條件為：功率400W、溫度4℃、時間5min，隨后于4℃，12000r·min^-1，離心分離10min，取上清液，得到所述微粒體酶液，

1.2酶促轉化反應

將得到的20ml所述微粒體酶液添加20ml?1μg/ml角鯊烯、2ml?2mmol/L還原型輔酶II、1ml?5mmol/L三磷酸腺苷、2ml?20mmol/L煙酰胺，反應5h，得到一種酶促轉化反應液，

1.3皂化反應

將所述酶促轉化反應液加入5ml?15％KOH-乙醇溶液，30℃振蕩反應2h，得到一種皂化反應液，

1.4萃取

將所述皂化反應液用有機溶劑石油醚萃取，萃取劑與反應液體積比為4∶1，萃取溫度30℃，萃取時間1h，萃取結束后，有機相在40℃氮氣或減壓條件下濃縮，得到7-脫氫膽固醇。

2.一種利用動物肝臟微粒體酶生物合成7-脫氫膽固醇的方法，其特征在于，該方法包括以下步驟：

1.1微粒體酶液的制備

將50g切成塊狀的新鮮豬肝臟放入pH?6.5、0.05mol/L的谷胱甘肽磷酸緩沖溶液中，在4℃條件下用組織勻漿機勻漿，兩層紗布過濾，濾液置于超聲波細胞破碎儀中，處理條件為：功率150W、溫度35℃、時間40min，隨后于4℃，12000r·min^-1，離心分離10min，取上清液，得到所述微粒體酶液，

1.2酶促轉化反應

將得到的20ml所述微粒體酶液添加20ml?40μg/ml角鯊烯、2ml?1mmol/L還原型輔酶II、1ml?2.5mmol/L三磷酸腺苷、2ml?30mmol/L煙酰胺，反應5h，得到一種酶促轉化反應液，

1.3皂化反應

將所述酶促轉化反應液加入5ml?15％KOH-乙醇溶液，70℃振蕩反應1h，得到一種皂化反應液，

1.4萃取

將所述皂化反應液用有機溶劑石油醚萃取，萃取劑與反應液體積比為6∶1，萃取溫度60℃，萃取時間4h，萃取結束后，有機相在40℃氮氣或減壓條件下濃縮，得到7-脫氫膽固醇。

3.一種利用動物肝臟微粒體酶生物合成7-脫氫膽固醇的方法，其特征在于，該方法包括以下步驟：

1.1微粒體酶液的制備

將50g切成塊狀的新鮮羊肝臟放入pH?9、0.05mol/L的谷胱甘肽磷酸緩沖溶液中，在4℃條件下用組織勻漿機勻漿，兩層紗布過濾，濾液置于超聲波細胞破碎儀中，處理條件為：功率300W、溫度4℃、時間20min，隨后于4℃，12000r·min^-1，離心分離10min，取上清液，得到所述微粒體酶液，

1.2酶促轉化反應

將得到的20ml所述微粒體酶液添加20ml?40μg/ml角鯊烯、2ml?2mmol/L還原型輔酶II、1ml?5mmol/L三磷酸腺苷、2ml?40mmol/L煙酰胺，1ml?1mmol/L?MgCL₂，反應5h，得到一種酶促轉化反應液，

1.3皂化反應

將所述酶促轉化反應液加入5ml?15％KOH-乙醇溶液，60℃振蕩反應2h，得到一種皂化反應液，

1.4萃取

將所述皂化反應液用有機溶劑石油醚萃取，萃取劑與反應液體積比為8∶1，萃取溫度40℃，萃取時間4h，萃取結束后，有機相在40℃氮氣或減壓條件下濃縮，得到7-脫氫膽固醇。