[發(fā)明專利]一種從裂殖壺菌提取并精制富含二十二碳六烯酸的方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 200910111657.4
• 申請日: 2009-05-06
• 公開（公告）號: CN101638361A
• 公開（公告）日: 2010-02-03
• 發(fā)明（設計）人: 江斌;吳松剛;黃建忠
• 申請（專利權）人: 廈門金達威集團股份有限公司;內蒙古金達威藥業(yè)有限公司
• 主分類號: C07C57/03
• 分類號: C07C57/03;C07C51/42;C12P7/64;C12R1/645
• 代理公司: 福州元創(chuàng)專利商標代理有限公司
• 代理人: 蔡學俊;吳欽緣

技術領域

本發(fā)明屬于生物技術領域，涉及一種從裂殖壺菌(Schizochytrium?ATCC?20888)中提取并精制富含二十二碳六烯酸(Docosahexaenoic?acid，簡稱DHA)的方法。

技術背景

二十二碳六烯酸(Docosahexaenoic?acid，簡稱DHA)是目前發(fā)現(xiàn)的碳鏈最長、不飽和度最高的長鏈高度不飽和脂肪酸(Long-chain?polyunsaturated?fatty?acids，Lc-PUFAs)。DHA是機體生物膜的重要結構組分，在嬰幼兒神經(jīng)發(fā)育、視網(wǎng)膜形成、智力發(fā)展等方面具有重要作用，而且也是前列腺素、環(huán)前列腺素和白三烯素等具有強烈生理活性的自身調節(jié)物質的前體，對預防心血管疾病、抗血脂、降血壓、抑制腫瘤形成等具有顯著作用(Hadley?KB，et?al，2009，World?Rev?Nutr?Diet.99：97-104；Hawthorne?KM，et?al，2009，J?Am?Diet?Assoc.109：708-712.)。由于具有上述多種重要生理功能，DHA已成為價值高、市場廣泛的脂肪酸產(chǎn)品。深海魚油是提取DHA的主要原料，全球每年用于提煉DHA的魚油約為1.1×10⁶噸(Gunstone?F，2001，Oleochemical?manufacture?and?application.)，由于過度開發(fā)捕撈深海魚類，魚油資源難以滿足人們對DHA日益增長的需求。隨著世界需求市場的供不應求，尋找DHA新的油源成為各國科學家亟待解決的問題。近年來的研究發(fā)現(xiàn)，深海魚類并不具備合成DHA的整套酶系，魚油中的DHA主要來自于食物鏈中的海洋DHA產(chǎn)生菌，裂殖壺菌(Schizochytrium)、破囊壺菌(Thraustochytrium)、寇氏裂殖壺菌(Crypthecodinium?cohnii)等海洋微生物才是自然界中DHA的真正第一生產(chǎn)者，通過發(fā)酵工程技術生產(chǎn)出的微生物細胞油已被確認是魚油的理想代替品(Chi?Z，et?al，2009，Appl?Microbiol?Biotechnol.81：1141-1148；Ganuza?E，et?al，2008，Aquaculture.277：109-116；Kang?DH，et?al，2007，Korean?Journal?of?Chemical?Engineering.24：651-654.)

由于寇氏裂殖壺菌培養(yǎng)周期較長，容易染菌；破囊壺菌脂肪酸組成復雜，較難分離純化，因此，人們把研究的目光投向裂殖壺菌。裂殖壺菌具有良好的產(chǎn)DHA特性：裂殖壺菌不僅像細菌一樣二分裂繁殖，生長速度快，而且其油脂可占自身干重的70％以上，DHA最高可占總油脂的90％，其中90％的油脂是中性脂，存在于細胞質中，提取簡單，極具有產(chǎn)業(yè)開發(fā)前途。

發(fā)明內容

本發(fā)明的目的是提供了一種采用有機溶劑高效萃取，從裂殖壺菌提取并精制富含二十二碳六烯酸的方法。

本發(fā)明的目的是通過下列技術措施實現(xiàn)的。

一種從裂殖壺菌Schizochytrium?ATCC?20888中提取并精制富含DHA脂肪酸的方法，其特征是：

1、先將裂殖壺菌發(fā)酵液絮凝處理再進行固液分離；

2、通過堿破壁后再采用機械破碎法將裂殖壺菌細胞破碎；

3、然后對破碎的裂殖壺菌細胞采用有機溶劑萃取，獲得富含DHA的粗油；

4、DHA粗油經(jīng)過脫膠、堿煉、脫色和脫臭后得到富含的精制油脂(DHA精油)。

所述的裂殖壺菌發(fā)酵液是通過下列方法獲得的：先將裂殖壺菌Schizochytrium?ATCC20888活化三代后進行種子培養(yǎng)，獲得活力較高的菌種(即處于對數(shù)生長期的菌種)，在含有碳源、氮源、無機鹽的培養(yǎng)基中發(fā)酵，收獲菌體。其中碳源優(yōu)選葡萄糖，氮源優(yōu)選蛋白胨與酵母膏，無機鹽優(yōu)選海水晶(天津市漢沽區(qū)同興海水晶廠)。

所述的發(fā)酵液絮凝處理過程是首先向裂殖壺菌發(fā)酵液中按照每升裂殖壺菌發(fā)酵液添加10-20g的絮凝劑，使發(fā)酵液絮凝并沉淀，將上層的水除去，留下裂殖壺菌細胞沉淀物。絮凝處理所用的絮凝劑為硫酸鋁鉀、硫酸鋁、聚合硫酸鐵、聚合氯化鋁、聚硅硫酸鋁或聚硅硫酸鐵。

所述的固液分離是指在裂殖壺菌細胞沉淀物中按照每升發(fā)酵液沉淀物添加3～100mL的質量濃度為95％的食用酒精；靜置后將上層清液除去，同時將沉降于下層的裂殖壺菌細胞進行離心，進一步除去上層清液。