[發明專利]一種從裂殖壺菌提取并精制富含二十二碳六烯酸的方法

無效

• 申請號: 200910111657.4
• 申請日: 2009-05-06
• 公開（公告）號: CN101638361A
• 公開（公告）日: 2010-02-03
• 發明（設計）人: 江斌;吳松剛;黃建忠
• 申請（專利權）人: 廈門金達威集團股份有限公司;內蒙古金達威藥業有限公司
• 主分類號: C07C57/03
• 分類號: C07C57/03;C07C51/42;C12P7/64;C12R1/645
• 代理公司: 福州元創專利商標代理有限公司
• 代理人: 蔡學俊;吳欽緣

1、一種從裂殖壺菌提取并精制富含二十二碳六烯酸的方法，其特征在于先將裂殖壺菌發酵液絮凝處理再進行固液分離，通過堿破壁后再將細胞機械破碎，然后對破碎的菌體采用有機溶劑萃取，獲得DHA粗油；DHA粗油經過脫膠、堿煉、脫色、脫臭后得到DHA精油。

2、如權利要求1所述的從裂殖壺菌提取并精制富含二十二碳六烯酸的方法，其特征在于所述的裂殖壺菌發酵液是通過下列方法獲得的：先將裂殖壺菌Schizochytrium?ATCC?20888活化三代后進行種子培養，獲得活力較高的菌種，在含有碳源、氮源、無機鹽的培養基中發酵，收獲菌體，其中碳源優選葡萄糖，氮源優選蛋白胨與酵母膏，無機鹽優選海水晶。

3、如權利要求1所述的從裂殖壺菌提取并精制富含二十二碳六烯酸的方法，其特征在于絮凝處理采用的絮凝劑為硫酸鋁鉀、硫酸鋁、聚合硫酸鐵、聚合氯化鋁、聚硅硫酸鋁或聚硅硫酸鐵。

4、如權利要求3所述的從裂殖壺菌提取并精制富含二十二碳六烯酸的方法，其特征在于絮凝劑的用量為每升裂殖壺菌發酵液添加10-20g的絮凝劑。

5、如權利要求1所述的從裂殖壺菌提取并精制富含二十二碳六烯酸的方法，其特征在于固液分離是指在裂殖壺菌細胞沉淀物中按照每升發酵液沉淀物添加3～100mL的質量濃度為95％的食用酒精；靜置后將上層清液除去，同時將沉降于下層的裂殖壺菌細胞進行離心，進一步除去上層清液。

6、如權利要求1所述的從裂殖壺菌提取并精制富含二十二碳六烯酸的方法，其特征在于機械破碎法對細胞進行破碎其過程是：首先用NaOH配制pH為12-14的水溶液，將固液分離步驟中離心所得的裂殖壺菌細胞倒入該水溶液中，堿性環境下進行破壁；然后將裂殖壺菌細胞送入膠體磨中，磨成細胞碎片，再送入均質破碎機中高壓破碎，獲得破碎細胞漿液，再次離心除去水份得到破碎細胞的物料。

7、如權利要求1所述的從裂殖壺菌提取并精制富含二十二碳六烯酸的方法，其特征在于所述的采用有機溶劑萃取，獲得富含DHA的粗油是指按照水∶物料∶有機溶劑(質量比)＝1∶1∶3～7的比例在萃取罐中進行萃取，攪拌20～40min左右，停止攪拌，靜置分層，最下層為水，中層為料渣，上層為有機溶劑和DHA粗油，取上層溶液通過減壓蒸發器將有機溶劑蒸出，反復多次抽提，獲得DHA粗油。

8、如權利要求1、7所述的從裂殖壺菌提取并精制富含二十二碳六烯酸的方法，其特征在于萃取所用的有機溶劑為丙酮、正己烷、石油醚、醋酸乙酯、環己烷。

9、如權利要求1所述的從裂殖壺菌提取并精制富含二十二碳六烯酸的方法，其特征在于所述的脫膠是采用磷酸脫膠，即將DHA粗油預熱到85～95℃，按照每升DHA粗油加入1～2g質量濃度為75～85％的磷酸攪拌均勻，添加20～30mL溫度為90～95℃的水，同時，以60rpm速度攪拌，當磷呈沉淀析出時，攪拌速度降低至30rpm，繼續攪拌10分鐘，完畢后靜置10分鐘，然后離心分離，獲得脫膠后的脫膠DHA粗油。

10、如權利要求1所述的從裂殖壺菌提取并精制富含二十二碳六烯酸的方法，其特征在于所述的堿煉是采用NaOH中和方法，即將脫膠后的脫膠DHA粗油打入堿煉鍋，快速攪拌并加熱至20～40℃，按每升脫膠后的脫膠DHA粗油勻速分散地噴灑100mL濃度為5moL/L的NaOH，加NaOH時間控制在20min左右；加NaOH完畢繼續快速攪拌30min后，改慢速攪拌并開始升溫至75～80℃，勻速噴灑入占脫膠后的DHA粗油重5％與油同溫或略高于油溫的軟水，加水時間控制在5min左右；加水完畢停止升溫及攪拌，靜置沉降3～4h，放出沉淀，將油打入水洗鍋，在快速攪拌下加熱到95℃左右，勻速分散噴灑入微沸的軟水，加水量約為油重15％，進行水洗，加水時間控制在20min左右；加水完畢在快速攪拌的條件下泵入水洗離心機進行油水分離，獲得堿煉后的堿煉DHA粗油。