[發(fā)明專利]一種擴增低含量基因突變DNA的引物設(shè)計方法及其應(yīng)用有效
| 申請?zhí)枺?/td> | 200910111500.1 | 申請日： | 2009-04-13 |
| 公開（公告）號： | CN101613698A | 公開（公告）日： | 2009-12-30 |
| 發(fā)明（設(shè)計）人： | 阮力;何東華;鄭立謀 | 申請（專利權(quán)）人： | 廈門艾德生物醫(yī)藥科技有限公司 |
| 主分類號： | C12N15/10 | 分類號： | C12N15/10;C12P19/34;C12Q1/68 |
| 代理公司： | 廈門市首創(chuàng)君合專利事務(wù)所有限公司 | 代理人： | 張松亭 |
| 地址： | 361000福建省廈門市海滄區(qū)*** | 國省代碼： | 福建;35 |
| 權(quán)利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 擴增 含量 基因突變 dna 引物 設(shè)計 方法 及其 應(yīng)用 | ||
1.一種擴增低含量基因突變DNA的引物設(shè)計方法，首先設(shè)計一對靶序列基本擴增引物，然后在所述基本擴增引物對中的一條引物的5′末端加一段與待擴增靶序列無關(guān)的GC寡核苷酸尾，離3′末端的第5-8個寡核苷酸處插入3個A堿基片段，突變位置放在3′末端1-4位。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種擴增低含量基因突變DNA的引物設(shè)計方法，其特征在于：所述GC寡核苷酸尾長度為2-5個堿基。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種擴增低含量基因突變DNA的引物設(shè)計方法，其特征在于：所述GC寡核苷酸尾的堿基數(shù)量為3bp，由GGG、CCC或是GC混合的堿基組成。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種擴增低含量基因突變DNA的引物設(shè)計方法，其特征在于：所設(shè)計的引物總長度不大于40bp。
5.一種擴增低含量基因突變DNA的PCR擴增方法，包括如下步驟：1)預(yù)變性；2)包括變性、引物退火和引物延伸循環(huán)的第一部分PCR擴增，循環(huán)數(shù)為3-10個；3)包括變性、引物退火和引物延伸循環(huán)的第二部分PCR擴增，循環(huán)數(shù)為35-45個，其特征在于：所述的PCR引物為如權(quán)利要求1所述方法設(shè)計而得，第二部分PCR擴增的退火溫度比第一部分PCR擴增的退火溫度高5℃-8℃。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的一種擴增低含量基因突變DNA的PCR擴增方法，其特征在于：所述的第一部分PCR擴增的退火溫度為50-55℃。
7.根據(jù)權(quán)利要求5所述的一種擴增低含量基因突變DNA的PCR擴增方法，其特征在于：所述的第二部分PCR擴增的退火溫度為58-60℃。
8.權(quán)利要求1所述的一種擴增低含量基因突變DNA的引物設(shè)計方法于核酸檢測中的應(yīng)用。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的引物設(shè)計方法于核酸檢測中的應(yīng)用，其特征在于：所述核酸檢測采用PCR方法、基因芯片檢測、膜雜交檢測。
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