[發(fā)明專利]多重?zé)晒?P C R同時(shí)檢測(cè)對(duì)蝦白斑綜合征病毒及對(duì)蝦傳染性皮下和造血器官壞死病毒的引物、探針、試劑盒及其檢測(cè)方法

無(wú)效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 200910111460.0
• 申請(qǐng)日: 2009-04-07
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN101603098A
• 公開(kāi)（公告）日: 2009-12-16
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 陳信忠;龔艷清;周昱;任聰;徐淑菲;孔繁德
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 廈門出入境檢驗(yàn)檢疫局檢驗(yàn)檢疫技術(shù)中心
• 主分類號(hào): C12Q1/70
• 分類號(hào): C12Q1/70;C12Q1/68;C12N15/11;G01N21/64;C12R1/93
• 代理公司: 廈門市新華專利商標(biāo)代理有限公司
• 代理人: 李 寧

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種多重?zé)晒釶CR同時(shí)檢測(cè)對(duì)蝦白斑綜合征病毒及對(duì)蝦傳染性皮下和造血器官壞死病毒的引物、探針、試劑盒及其檢測(cè)方法。

背景技術(shù)

白斑綜合征病毒(White?spot?syndrome?virus，WSSV)是對(duì)蝦白斑綜合征(white?spot?syndrome，WSS)的致病原，WSS是全球?qū)ξr養(yǎng)殖業(yè)危害性最大的病害之一，是國(guó)際獸醫(yī)局(OIE)規(guī)定需要報(bào)告的重要水生動(dòng)物疾病，在我國(guó)農(nóng)業(yè)部2008年新發(fā)布的動(dòng)物傳染病名錄中被列為一類傳染病。自20世紀(jì)90年代初首先在我國(guó)臺(tái)灣地區(qū)發(fā)生以來(lái)，至今已在世界各國(guó)的對(duì)蝦養(yǎng)殖地區(qū)流行，造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失。WSSV宿主十分廣泛，由該病毒引起的病害傳播迅速，可導(dǎo)致斑節(jié)對(duì)蝦(Penaeus?monodon)、日本對(duì)蝦(P.japonicus)、中國(guó)對(duì)蝦(Fenneropenaeus?chinensis)、印度對(duì)蝦(P.indicus)、南美白對(duì)蝦(P.vannamei)、褐對(duì)蝦(P.aztecus)、桃紅對(duì)蝦(P.duorarum)等對(duì)蝦感染發(fā)病大規(guī)模死亡。對(duì)蝦傳染性皮下及造血器官壞死病(Infections?Hypodermal?and?Haematopoietic?Nerosis?Viurs?IHHNV)也是世界各地養(yǎng)殖對(duì)蝦常見(jiàn)的傳染病之一，被國(guó)際獸醫(yī)局(OIE)列為重要的甲殼動(dòng)物傳染病。該病首先在夏威夷紅額角對(duì)蝦(P.stylirostris)仔蝦體內(nèi)發(fā)現(xiàn)，后來(lái)發(fā)現(xiàn)該病毒在亞洲和太平洋地區(qū)廣泛存在。IHHNV主要危害紅額角對(duì)蝦，發(fā)病后死亡率可高達(dá)90％，對(duì)稚蝦和幼蝦危害最嚴(yán)重。對(duì)南美白對(duì)蝦、斑節(jié)對(duì)蝦和日本對(duì)蝦也有較大危害，可導(dǎo)致慢性矮小殘缺綜合癥。該病毒還可感染短溝對(duì)蝦(P.semisulcatus)、印度對(duì)蝦、中國(guó)對(duì)蝦和加州對(duì)蝦(P.californiensis)。我國(guó)是養(yǎng)蝦大國(guó)，對(duì)蝦養(yǎng)殖是我國(guó)許多沿海省市的支柱產(chǎn)業(yè)，建立快速、準(zhǔn)確的WSSV和IHHNV檢測(cè)方法，可以為口岸動(dòng)物檢疫提供檢測(cè)依據(jù)，有效地控制這些病害的傳播，應(yīng)用到生產(chǎn)實(shí)踐中，可以為預(yù)防這些傳染病提供診斷依據(jù)。

發(fā)明內(nèi)容

為了解決上述問(wèn)題，本發(fā)明的目的在于提供了一種多重?zé)晒釶CR同時(shí)檢測(cè)對(duì)蝦白斑綜合征病毒及對(duì)蝦傳染性皮下和造血器官壞死病毒的引物、探針、試劑盒及其檢測(cè)方法。本發(fā)明具有特異性好，檢測(cè)方法快速簡(jiǎn)便，準(zhǔn)確性高，靈敏度高的特點(diǎn)。

為達(dá)到上述的目的，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案：

一種多重?zé)晒釶CR同時(shí)檢測(cè)對(duì)蝦白斑綜合征病毒及對(duì)蝦傳染性皮下和造血器官壞死病毒的引物，由檢測(cè)對(duì)蝦白斑綜合征病毒(WSSV)的正向引物FP1和反向引物RP1以及檢測(cè)對(duì)蝦傳染性皮下和造血器官壞死病毒(IHHNV)的正向引物FP2和反向引物RP2組成；其中檢測(cè)對(duì)蝦白斑綜合征病毒的引物的正向引物FP1的序列SEQ?ID?NO.1和反向引物RP1的序列SEQ?ID?NO.2如下：

SEQ?ID?NO.1：5′-TGGAATGTCATCGCCAGCAC-3′；

SEQ?ID?NO.2：5′-CAGTTCAGATTCGTTACCGTTTCC-3′；

檢測(cè)對(duì)蝦傳染性皮下和造血器官壞死病毒的引物的正向引物FP2的序列SEQ?ID?NO.4和反向引物RP2的序列SEQ?ID?NO.5如下：

SEQ?ID?NO.4：5’-GACATAGAGCTACAATCCTCGCCTAT-3’；

SEQ?ID?NO.5：5’-CAAGTACCGTAGTCGCTTCAGCTT-3’。

一種多重?zé)晒釶CR同時(shí)檢測(cè)對(duì)蝦白斑綜合征病毒及對(duì)蝦傳染性皮下和造血器官壞死病毒的探針，由檢測(cè)對(duì)蝦白斑綜合征病毒(WSSV)的探針LP1和檢測(cè)對(duì)蝦傳染性皮下和造血器官壞死病毒(IHHNV)的探針LP2組成；其中檢測(cè)對(duì)蝦白斑綜合征病毒的引物配合使用的探針LP1的核苷酸序列為：

SEQ?ID?NO.3：5′-CACCGCCGACGCCAAGGGAACTG-3′；

檢測(cè)對(duì)蝦傳染性皮下和造血器官壞死病毒的引物配合使用的探針LP2的核苷酸序列為：

SEQ?ID?NO.6：5′-TGGGAGTTACCTTTGCTGCCAGAGCC-3′。