[發明專利]檢測水泡性口炎抗體試劑盒及其制備方法

無效

• 申請號: 200910109418.5
• 申請日: 2009-08-17
• 公開（公告）號: CN101625363A
• 公開（公告）日: 2010-01-13
• 發明（設計）人: 花群義;楊俊興;張彩虹;阮周曦;曾少靈;曹琛福;林慶燕;秦智鋒;陳書琨;陶虹
• 申請（專利權）人: 花群義
• 主分類號: G01N33/577
• 分類號: G01N33/577;G01N33/569;G01N33/535;C12N15/06;C12P21/08
• 代理公司: 深圳市順天達專利商標代理有限公司
• 代理人: 陸 軍

技術領域

本發明涉及病毒抗體檢測領域，尤其涉及一種檢測水泡性口炎病毒抗體試劑盒及其制備方法。

背景技術

水泡性口炎是由彈狀病毒科水泡病毒屬的水泡性口炎病毒(Vesicularstomatitis?Virus，VSV)引起的人畜共患的重大動物疫病，目前有印第安納(Indiana，IN型)和新澤西(New?Jersey，NJ型)兩個血清型。牛、豬、馬、羊和其它多種野生動物可感染水泡性口炎病毒，人感染該病毒后出現類似流感和登革熱的癥狀。VSV基因組編碼N，NS，M，G，L等5種病毒蛋白，其中N蛋白是該病毒核衣殼的主要蛋白，為VSV的群特異性抗原。

由于水泡性口炎的臨床癥狀與口蹄疫(FMD)相似，因此該病的存在和流行直接影響人類及動物健康，造成巨大經濟損失，影響社會穩定。1950年證實此病為人畜共患病。1958年～1978年我國陜西省鳳縣暴發，造成重大經濟損失。1995年美國西南部發生牛、馬水泡性口炎，波及到6個州的367個牧場，造成的損失高達5000萬美元～1億美元。1996年，拉美有11個國家報告發生VS。2004年美國發生259起水泡性口炎，涉及的易感動物幾萬頭/匹/只，有牛、馬、綿羊、山羊和豬等。2006年6月巴拿馬有4個地區的水泡性口炎發病率突然升高，涉及的易感動物有19733頭/匹/只。

目前，水泡性口炎最常用的診斷方法是病毒分離鑒定、病毒中和試驗(VN)、補體結合試驗(CF)、液相阻斷ELISA(LP-ELISA)、競爭酶聯免疫吸附試驗(c-ELISA)、反轉錄聚合酶鏈反應(RT-PCR)等。然而，上述方法普遍存在試驗復雜、麻煩、不安全、耗時的問題，不易推廣使用。尤其是VN和CF兩種方法，其需在生物安全三級(P3)實驗室內進行，且有時產生非特異性反應，其應用受到極大限制。

發明內容

本發明要解決的技術問題在于，針對上述水泡性口炎診斷中存在的試驗復雜、麻煩、不安全、耗時的問題，提供一種檢測水泡性口炎病毒抗體試劑盒及其制備方法。

本發明解決上述技術問題的技術方案是，提供一種檢測水泡性口炎病毒抗體試劑盒，包括分別放置的試劑I和試劑II，其中所述試劑I為水泡性口炎病毒抗原包被酶聯免疫吸附試驗測定板，所述試劑II為單克隆抗體IgG-HRP酶結合物，其中所述單克隆抗體IgG-HRP酶結合物為辣根過氧化酶標記的鼠抗水泡性口炎病毒病毒的特異性單克隆抗體。

在本發明所述的檢測水泡性口炎病毒抗體試劑盒中，還包括分別放置的陽性血清、陰性血清、20倍濃縮洗滌液、10倍濃縮洗滌液、底物I、底物II、底物III以及終止液。

在本發明所述的檢測水泡性口炎病毒抗體試劑盒中，所述20倍濃縮洗滌液為20倍濃縮的含0.05％?Tween-20的0.01mol/L?pH?7.4?PBS/PBST；10倍濃縮稀釋液為10倍濃縮的含1％明膠的PBST；底物I為pH?6.0的乙酸-檸檬酸緩沖液；底物II為3.3’-5.5’-四甲基聯苯胺溶液；底物III為雙氧水溶液；終止液為1mol/L?H₂SO₄硫酸溶液。

在本發明所述的檢測水泡性口炎病毒抗體試劑盒中，各組成部分的體積或數量如下：

試劑盒組成部分名稱：????????????????????????????????體積或數量：

水泡性口炎病毒抗原包被酶聯免疫吸附試驗測定板????????2板96孔酶標板

單克隆抗體IgG-HRP酶結合物???????????????????????????0.5ml

陽性血清????????????????????????????????????????????1ml

陰性血清????????????????????????????????????????????1ml

20倍濃縮洗滌液??????????????????????????????????????50ml

10倍濃縮稀釋液??????????????????????????????????????30ml

底物I???????????????????????????????????????????????20ml

底物II??????????????????????????????????????????????2ml

底物III?????????????????????????????????????????????1ml