[發明專利]大豆檢疫性真菌病害多重實時熒光PCR檢測方法及試劑盒有效
| 申請號： | 200910106615.1 | 申請日： | 2009-04-10 |
| 公開（公告）號： | CN101857905A | 公開（公告）日： | 2010-10-13 |
| 發明（設計）人： | 章桂明;陳枝楠;程穎慧;王穎 | 申請（專利權）人： | 深圳出入境檢驗檢疫局動植物檢驗檢疫技術中心 |
| 主分類號： | C12Q1/70 | 分類號： | C12Q1/70;C12Q1/68;G01N21/64;C12N15/11;C12R1/94 |
| 代理公司： | 深圳鼎合誠知識產權代理有限公司 44281 | 代理人： | 羅瑤 |
| 地址： | 518001 廣東省深圳市羅湖區和平路*** | 國省代碼： | 廣東;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 大豆 檢疫 真菌 病害 多重 實時 熒光 pcr 檢測 方法 試劑盒 | ||
1.一種對大豆真菌病害實時熒光PCR檢測的方法，包括如下步驟：
步驟一：設計檢測選自大豆疫病菌、大豆擬莖點霉種子腐爛病菌、大豆南方莖潰瘍病菌、大豆北方莖潰瘍病菌中兩種以上大豆真菌病害的引物和寡核苷酸探針；
步驟二：將步驟一中設計的兩種以上大豆真菌病害的引物和寡核苷酸探針同時進行實時熒光PCR反應；
步驟三：根據熒光信號類型判定檢測樣品的大豆真菌病害。
2.根據權利要求1所述的對大豆真菌病害實時熒光PCR檢測的方法，其特征在于：所述大豆疫病菌的一對引物是：
P.SOJAE-1F：5’-TGGTTTGGGTCCTCCTCGT-3’SEQ?ID?NO：1
P.SOJAE-1R：5’-TGTGCGAGCCTAGACATCCA-3’SEQ?ID?NO：2，
所述大豆擬莖點霉種子腐爛病菌的一對引物是：
PL-1F：5’-AGCATCACTTTCATTCCCACTT-3’SEQ?ID?NO：3
PL-1R：5’-GGCTGTGTAGAAAGAGTCAGCAT-3’SEQ?ID?NO：4，
所述大豆南方莖潰瘍病菌的一對引物是：
DPM-1F：5’-CCAGAAACCCTTTGTGAACTC-3’SEQ?ID?NO：5
DPM-1R：5’-TGTTTTTTGCTCAGAGTTTCG-3’SEQ?ID?NO：6，
所述大豆北方莖潰瘍病菌的一對引物是：
DPC-1F：5’-GCTTGGTGTTGGGGCACT-3’SEQ?ID?NO：7
DPC-1R：5’-TACGCTCGGGGTCCTGG-3’SEQ?ID?NO：8。
3.根據權利要求1或2所述對大豆病害實時熒光PCR檢測的方法，其特征在于：
所述大豆疫病菌的寡核苷酸探針是：
P.SOJAE-1Q：5’-SAT-ACCCATTCTTAAATACTGAA-SAT-3’SEQID?NO：9，
所述大豆擬莖點霉種子腐爛病菌的寡核苷酸探針是：
PL-Q：5’-URA-TCTGCTCCAGAGAGCTT-URA-3’SEQ?ID?NO：10，
所述大豆南方莖潰瘍病菌的寡核苷酸探針是：
DPM-1Q：5’-JUP-ACAAGAGTTGGCTTGGC-JUP-3’SEQ?IDNO：11，
所述大豆北方莖潰瘍病菌的寡核苷酸探針是：
DPC-1Q：5’-MAR-TGAAATTCATTGGCGAGCT-MAR-3’SEQ?IDNO：12。
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