[發明專利]大豆檢疫性病毒病害多重實時熒光PCR檢測方法及試劑盒

有效

• 申請號: 200910106536.0
• 申請日: 2009-04-10
• 公開（公告）號: CN101857904A
• 公開（公告）日: 2010-10-13
• 發明（設計）人: 章桂明;陳枝楠;程穎慧;王穎
• 申請（專利權）人: 深圳出入境檢驗檢疫局動植物檢驗檢疫技術中心
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/68;G01N21/64;C12N15/11;C12R1/94
• 代理公司: 深圳鼎合誠知識產權代理有限公司 44281
• 代理人: 羅瑤

1.一種對大豆病毒病害實時熒光PCR檢測的方法，包括如下步驟：

步驟一：設計檢測選自煙草環斑病毒、南方菜豆花葉病毒、番茄環斑病毒、南芥菜花葉病毒中兩種以上病毒的引物和寡核苷酸探針；

步驟二：將步驟一中設計的兩種以上病毒的引物和寡核苷酸探針同時進行實時熒光PCR反應；

步驟三：根據熒光信號類型判定檢測樣品的病毒。

2.根據權利要求1所述的對大豆病毒病害實時熒光PCR檢測的方法，其特征在于：所述煙草環斑病毒的一對引物是：

TRSV-ZFP：5’-AACTGCCTACCAAGGTTTTCAT-3’??SEQ?ID?NO：1

TRSV-ZRP：5’-TCCCCATAGTTGAACTGCCA-3’??SEQ?ID?NO：2，

所述南方菜豆花葉病毒的一對引物是：

SBMV-1F：5’-TGGTCCTTCGACGCAGTCT-3’??SEQ?ID?NO：3

SBMV-1R：5’-TGGCTTTCTCGTTGATTTCC-3’??SEQ?ID?NO：4，

所述番茄環斑病毒的一對引物是：

ToRSV-2-FP：5’-TTGGCAAAGGAGTGGAGGAA-3’??SEQ?ID?NO：5

ToRSV-2-RP：5’-TCCACAGGTATACGGGCTTCA-3’??SEQ?ID?NO：6，

所述南芥菜花葉病毒的一對引物是：

ARMV-1-FP1：5’-AGGCCACTGGCATGGATG-3’??SEQ?ID?NO：7

ARMV-1-RP1：5’-CGCATCCCATGTTTTGCA-3’??SEQ?ID?NO：8。

3.根據權利要求1或2所述對大豆病毒病害實時熒光PCR檢測的方法，其特征在于：

所述煙草環斑病毒的寡核苷酸探針是：

TRSV-ZP：5’-MAR-AGATGCAGATGTGCATGA-MAR-3’SEQ?IDNO：9，

所述南方菜豆花葉病毒的寡核苷酸探針是：

SBMV-1Q：5’-URA-AGTCTGCAAGAAGGCGCA-URA-3’SEQ?IDNO：10，

所述番茄環斑病毒的寡核苷酸探針是：

ToRSV-2-Q：5’-JUP-CAGCCACTGCTTGGT-JUP-3’SEQ?ID?NO：11，

所述南芥菜花葉病毒的寡核苷酸探針是：

ARMV-1-1Q：5’-SAT-CGTCCCGTGTCTGTGCT-SAT-3’SEQ?IDNO：12。