[發明專利]一種純化愛啡肽的方法有效
| 申請號： | 200910104986.6 | 申請日： | 2009-01-13 |
| 公開（公告）號： | CN101538314A | 公開（公告）日： | 2009-09-23 |
| 發明（設計）人： | 劉建;李紅玲;馬亞平;袁建成 | 申請（專利權）人： | 深圳市翰宇藥業有限公司 |
| 主分類號： | C07K7/06 | 分類號： | C07K7/06;C07K1/20;C07K1/18;A61P7/02;A61P9/10 |
| 代理公司： | 深圳市科吉華烽知識產權事務所 | 代理人： | 胡吉科 |
| 地址： | 518000廣東省深圳市*** | 國省代碼： | 廣東;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 純化 愛啡肽 方法 | ||
1.一種純化愛啡肽的方法，包括以下步驟：
步驟一、純化，取一合適大小的布氏漏斗，墊一層濾紙，然后鋪上一層厚2?cm?-3cm的硅藻土，上面再墊一層濾紙，將愛啡肽氧化液倒入漏斗進行減壓抽濾，收集濾液備用；
步驟二、進一步純化，以烷基硅烷鍵合硅膠為固定相的色譜柱，柱子直徑和長度為：5?cm?×?25?cm，以0.1%三氟醋酸水溶液作為流動相A相，以流速為70-80?ml/min，檢測波長為280?nm，梯度為30?min?內15%～30%，進樣量為1.0-1.2?g的色譜純乙腈作為流動相B相，將色譜柱用流動相A平衡后上樣，上樣量為2.0-2.4L樣品溶液，線性梯度洗脫30min，收集目的峰，將收集的目的肽溶液于水溫不超過37?℃下減壓旋蒸濃縮至約50-70?mg/mL?后備用；
步驟三、轉鹽，將色譜柱用去離子水平衡后上樣，上樣量為30-40ml樣品溶液，用1-2%?醋酸水溶液洗脫50min，收集目的峰，將收集的目的肽溶液合并旋蒸濃縮至約100-150?mg/mL?后轉至合適大小容器，然后進行冷凍干燥，即可得到純度大于98.5%的符合要求的愛啡肽，純化收率達73.2%，其中所述的步驟三的純化條件為：
色譜柱填料為陰離子交換樹脂：Amberlite?IRA-93；
柱子直徑和長度為：?5?cm?×?25?cm?；
流動相：?1-2%?醋酸水溶液；
流速：50-60?ml/min；
檢測波長：280?nm；
進樣量為?1.5-2.0g。
2.一種純化愛啡肽的方法，包括以下步驟：
步驟一、純化，取一合適大小的布氏漏斗，墊一層濾紙，然后鋪上一層厚2?cm?-3cm的硅藻土，上面再墊一層濾紙，將愛啡肽氧化液倒入漏斗進行減壓抽濾，收集濾液備用；
步驟二、進一步純化，以烷基硅烷鍵合硅膠為固定相的色譜柱，柱子直徑和長度為：15?cm?×?25?cm，以0.1%三氟醋酸水溶液作為流動相A相，以流速為400-500?ml/min，檢測波長為280?nm，梯度為30?min?內15%～30%，進樣量為15-18?g的色譜純乙腈作為流動相B相，將色譜柱用流動相A平衡后上樣，上樣量為15-20L樣品溶液，線性梯度洗脫30min，收集目的峰，將收集的目的肽溶液于水溫不超過37?℃下減壓旋蒸濃縮至約50-70?mg/mL?后備用；
步驟三、轉鹽，將色譜柱用去離子水平衡后上樣，上樣量為160-180ml樣品溶液，用1-2%?醋酸水溶液洗脫75?min，收集目的峰，將收集的目的肽溶液合并旋蒸濃縮至約100-150?mg/mL?后轉至合適大小容器，然后進行冷凍干燥，即可得到純度大于98.5%的符合要求的愛啡肽，純化收率達72.7%，其中所述的步驟三的純化條件為：
色譜柱填料為陰離子交換樹脂：Amberlite?IRA-93；
柱子直徑和長度為：15?cm?×?45?cm?；
流動相：1-2%?醋酸水溶液；
流速：150-170ml/min；
檢測波長：280?nm；
進樣量為?6.0-8.0g。
3.一種純化愛啡肽的方法，包括以下步驟：
步驟一、純化，取一合適大小的布氏漏斗，墊一層濾紙，然后鋪上一層厚2?cm?-3cm的硅藻土，上面再墊一層濾紙，將愛啡肽氧化液倒入漏斗進行減壓抽濾，收集濾液備用；
步驟二、進一步純化，以烷基硅烷鍵合硅膠為固定相的色譜柱，柱子直徑和長度為：30cm?×?25?cm，以0.1%三氟醋酸水溶液作為流動相A相，以流速為1500-2000?ml/min，檢測波長為280?nm，梯度為30?min?內15%～30%，進樣量為60-80g的色譜純乙腈作為流動相B相，將色譜柱用流動相A平衡后上樣，上樣量為60-80L樣品溶液，線性梯度洗脫30min，收集目的峰，將收集的目的肽溶液于水溫不超過37?℃下減壓旋蒸濃縮至約50-70?mg/mL?后備用；
步驟三、轉鹽，將色譜柱用去離子水平衡后上樣，上樣量為1000-1100ml樣品溶液，用1-2%?醋酸水溶液洗脫160min，收集目的峰，將收集的目的肽溶液合并旋蒸濃縮至約100-150?mg/mL?后轉至合適大小容器，然后進行冷凍干燥，即可得到純度大于98.5%的符合要求的愛啡肽，純化收率達71.3%，其中所述的步驟三的純化條件為：
色譜柱填料為陰離子交換樹脂：Amberlite?IRA-93；
柱子直徑和長度為：30?cm?×?70?cm；
流動相：1-2%?醋酸水溶液；
流速：750-850?ml/min；
檢測波長：280?nm；
進樣量為40.0-50.0g。
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