[發明專利]人胚肺成纖維細胞乙型腦炎疫苗及其制備方法

有效

• 申請號: 200910103513.4
• 申請日: 2009-03-26
• 公開（公告）號: CN101524536A
• 公開（公告）日: 2009-09-09
• 發明（設計）人: 蔡勇;朱文漓
• 申請（專利權）人: 成都康華生物制品有限公司
• 主分類號: A61K39/12
• 分類號: A61K39/12;A61K47/42;A61K47/26;A61P31/14
• 代理公司: 溫州甌越專利代理有限公司
• 代理人: 王阿寶

技術領域

本發明涉及生物工程領域，具體地是涉及由人胚肺成纖維細胞制 備的乙型腦炎滅活疫苗和減毒活疫苗，及其制備工藝。

背景技術

乙型腦炎是一種由中樞神經系統急性病毒感染導致的傳染性疾 病，簡稱乙腦，由乙腦病毒引起，其發病年齡以10歲以下兒童為主。 乙腦傳染源是被感染的人或動物，再通過蚊蟲的叮咬進而傳播給其他 人或動物，豬與蚊被認為是該病毒的主要長期儲存宿主和擴散宿主。 乙腦在流行地區年發病率高達10～100/10萬，近30億人口生活在乙 型腦炎流行區，主要包括東南亞及西太平洋地區，此地區每年新生兒 超過7000萬。乙腦在亞洲每年至少引起50000臨床病例和10000例 病死，約85％病例發生在15歲以下兒童，10歲以下兒童易產生嚴重 后遺癥，如：失語、癱瘓、精神異常、癡呆、肢體彎曲畸形、扭轉痙 攣等。最近幾十年中，乙型腦炎的數起暴發流行越來越向曾經是非流 行的地區擴大，同時伴隨很高的病死率和嚴重的持久性神經系統后遺 癥，因而在亞洲很多國家和地區，乙腦成為嚴重的公共健康問題。中 國乙型腦炎的流行具有明顯的季節性特點，多發于夏、秋季節，90％ 病例發生于7、8、9三個月。

流行性乙型腦炎病毒(Japanese?B?Encephalitis?Virus，JEV)簡稱 乙腦病毒，屬黃病毒科黃病毒屬。病毒顆粒呈二十面體對稱結構，直 徑45-50nm，病毒顆粒由核心、包膜和刺突組成。基因為正鏈單股 RNA，RNA包被于多肽的衣殼C中，組成病毒顆粒的核心。其包膜 中有糖基化蛋白E和非糖基化蛋白prM/M。

目前還沒有治療乙型腦炎的特效藥物，從環境方面控制其傳播的 效果不理想。乙型腦炎疫苗的免疫接種是控制乙型腦炎疾病最為經濟 有效地措施。預防乙型腦炎對于保護兒童健康更是顯得極為重要。我 國規定15歲以下未成年人可免費接種乙腦疫苗，接種乙腦疫苗后， 人群的保護率可達90％以上。

由于乙型腦炎疫苗基礎免疫始于6月齡的健康嬰幼兒，對疫苗的 首要要求就是要保證疫苗有足夠的安全性。目前世界上應用較多的主 要有三種乙腦疫苗，第一種是以日本為代表的用感染乙腦病毒的小白 鼠腦組織制備的純化乙腦滅活疫苗以及中國生產的原代地鼠腎細胞 培養的乙腦滅活疫苗，這類滅活疫苗免疫原性弱，需多次接種，造成 疫苗中殘存的動物組織外源物質不可避免地帶入人體，是多見過敏反 應的重要原因，例如，經鼠腦組織培養的滅活疫苗以疼痛、發紅、腫 脹的局部副反應約為20％，包括頭疼、發熱、肌痛、不適和胃腸道癥 狀的全身性反應為10～30％，而由原代地鼠腎細胞培養的滅活疫苗超 過38℃的發熱高達12％，在減少牛血清殘留量后，超過38℃的發熱 減至6％；第二種是原代地鼠腎乙腦減毒疫苗，疫苗的細胞基質也來 源于普通級動物，無法保證不攜帶外源因子。減毒活疫苗雖然可以減 少多次接種引發的過敏反應，但有報道稱減毒疫苗病毒在有免疫功能 障礙的動物體內可增殖，并引起死亡，在接種免疫功能障礙者時，有 可能造成安全性問題。其次，活疫苗因存在諸多問題而尚未得到WHO 的認可，因其有可能導致嚴重的潛在病毒污染問題；第三種是北京生 物制品研究所以Vero細胞為培養基質生產的凍干乙腦純化滅活疫苗， 這種疫苗已在中國境內投入使用，雖避免了上述疫苗缺陷，在安全性 上有顯著提高，但Vero細胞超過232代次后在裸鼠體內有致瘤現象， 因此，美國FDA要求用Vero細胞生產的疫苗，生產過程中要有去除 細胞的工藝，必須要保證成品中無殘余細胞成分。

現正在開發研究的新型乙腦疫苗有美國和韓國合作的狗腎減毒 活疫苗，這種疫苗仍使用動物細胞系，也不能避免帶入動物組織外源 物質，仍存在安全性問題。