[發明專利]人胚肺成纖維細胞乙型腦炎疫苗及其制備方法

有效

• 申請號: 200910103513.4
• 申請日: 2009-03-26
• 公開（公告）號: CN101524536A
• 公開（公告）日: 2009-09-09
• 發明（設計）人: 蔡勇;朱文漓
• 申請（專利權）人: 成都康華生物制品有限公司
• 主分類號: A61K39/12
• 分類號: A61K39/12;A61K47/42;A61K47/26;A61P31/14
• 代理公司: 溫州甌越專利代理有限公司
• 代理人: 王阿寶

1.一種人胚肺成纖維細胞乙型腦炎疫苗的制備方法，其特征在于包 括以下步驟：

使用復蘇的人胚肺成纖維細胞MRC-5，細胞濃度為10⁶個/ml，使 用5g/L的Cytodex?2在50L的生物反應器內培養，工作體積40L， 轉速40～45轉/分鐘，溶氧25～50％，細胞營養液使用含8％-10％小 牛血清和24-32U/ml慶大霉素的MEM培養液，PH7.0-7.2，培養 溫度37℃，隨時觀察細胞生長情況，根據細胞生長情況反應器自 動補液調整培養液PH，連續培養6天，直到細胞密度達到10⁷個/ml 時，用Earle氏液洗滌2次后，加入不含小牛血清、含0.2％w/w 人白蛋白的MEM液，PH7.4-7.6，之后接種人胚肺成纖維細胞乙 腦病毒弱毒株SA14-14-2毒種，使用SA14-14-2株在MRC-5細胞 上傳代的第3代工作毒種，毒種濃度MOI?0.001，病毒培養溫度33- 35℃，24h后換以新鮮的細胞維持液，并于種毒后72-96h開始收 獲病毒，其病毒滴度達10^7.0pfu/ml，收獲后的病毒合并液即為疫 苗原液，用截留30萬分子量的超濾器濃縮成20倍濃縮疫苗液， 濃縮疫苗過離子交換柱DEAE-Sepharose?FF和凝膠過濾柱 Sepharose?4FF，經二步驟柱層析后，得到純化減毒活疫苗，加入 保護劑后凍干制成純化疫苗成品。