[發(fā)明專利]多球殼菌素粗品的化學(xué)分離純化方法

無效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 200910103398.0
• 申請(qǐng)日: 2009-03-17
• 公開（公告）號(hào): CN101503368A
• 公開（公告）日: 2009-08-12
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 毛先兵;徐紅娟;余佳文;朱華李;陳仕江;馬開森;鐘國躍
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 重慶市中藥研究院
• 主分類號(hào): C07C229/30
• 分類號(hào): C07C229/30;C07C227/18;C07C227/40;B01D15/34
• 代理公司: 重慶市前沿專利事務(wù)所
• 代理人: 郭 云

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及多球殼菌素粗品的分離純化方法，特別涉及多球殼菌素粗 品的化學(xué)分離純化方法。

背景技術(shù)

多球殼菌素具有多種藥理作用。Fujita等研究顯示，多球殼菌素具有 顯著的雙向免疫調(diào)節(jié)作用，能阻斷白介素-2受體以下的途徑，抑制絲氨酸 棕櫚酰轉(zhuǎn)移酶活性，從而特異性抑制T細(xì)胞的增殖。另外，Hojjati等報(bào)道 多球殼菌素可抑制動(dòng)脈粥樣硬化形成，利用多球殼菌素抑制鞘脂類合成的 關(guān)鍵酶——絲氨酸棕櫚酰轉(zhuǎn)移酶的機(jī)理，連續(xù)60天對(duì)8周齡的動(dòng)脈粥樣硬化 的大鼠每隔一天注射濃度為0.3mg/kg多球殼菌素，結(jié)果顯示多球殼菌素對(duì) 鞘脂類的合成有明顯的抑制作用，該大鼠動(dòng)脈硬化損傷面積明顯減少，因 此，多球殼菌素抑制絲氨酸棕櫚酰轉(zhuǎn)移酶活性可能作為治療動(dòng)脈粥樣硬化 的一個(gè)選擇。基于多球殼菌素的藥理價(jià)值及臨床應(yīng)用前景，制備醫(yī)藥工業(yè) 所需的高純度多球殼菌素具有重要意義。多球殼菌素內(nèi)酯也具有與多球殼 菌素相似藥理作用。

目前關(guān)于多球殼菌素分離純化方法的報(bào)道都不是采用化學(xué)分離純化方 法，F(xiàn)ujita等(Fungal?metabolites.Part?11.A?potent?immunosuppressive activity?found?in?Isaria?sinclairii?metabolite.Fujita?T，et?al.J.Antibiotics，1994， 47(2)：208～215)采用免疫抑制細(xì)胞模型活性跟蹤，通過聯(lián)用大孔吸附樹 脂和制備薄層色譜分離純化獲得多球殼菌素。Kluepfel等(Myriocin，a?new antifungal?antibiotic?from?Myriococcum?albomyces.Kluepfel?D，et?al.Journal of?Antibiotics，25：109～115，1972)以水-甲醇-二氯甲烷采取液液萃取結(jié)晶 工藝純化多球殼菌素；該方法工藝簡單，然而得率低，重復(fù)性差，操作技 術(shù)難度大。這些方法不足之處在于不適宜工業(yè)化。目前關(guān)于多球殼菌素內(nèi) 酯制備方法的報(bào)道中，文獻(xiàn)(Fungal?metabolites.Part?12.Potent?immuno- suppressant，14-deoxomyriocin，(2S，3R，4R)-(E)-2-amino-3，4-dihydroxy- 2-hydroxymethyleicos-6-enoic?acid?and?structure-activity?relationships?of myriocin?derivatives.Fujita?et?al.Journal?of?Antibiotics，47：216～224，1994) 提供了一種以多球殼菌素甲醇溶液與氯化氫甲醇溶液反應(yīng)，反應(yīng)物以硅膠 為色譜介質(zhì)，以氯仿-甲醇為洗脫劑洗脫，隨后以氯仿-石油醚結(jié)晶，制備 多球殼菌素內(nèi)酯單體的方法。如將該方法用于分離純化多球殼菌素粗品是 不可行的，因?yàn)樵摲椒ㄊ遣捎枚嗲驓ぞ貑误w制備多球殼菌素內(nèi)酯，需先 制備多球殼菌素單體。目前還沒有使用化學(xué)方法進(jìn)行分離純化多球殼菌素 粗品的報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是提供一種能簡化產(chǎn)品后續(xù)純化流程、提高得率、降低 能耗、適合工業(yè)化的多球殼菌素粗品的化學(xué)分離純化方法。

本發(fā)明采用的技術(shù)方案如下：多球殼菌素粗品的分離純化方法，包括 以下步驟：

(1)取多球殼菌素重量含量是2～50％的多球殼菌素粗品用無水乙醇 溶解后硅膠柱色譜分離，用溶劑A與酸催化劑的混合溶液洗脫，收集多 球殼菌素內(nèi)酯餾分；其中所述溶劑A與酸催化劑的體積比為6～12.5∶ 0.2～1.5；所述溶劑A是選自乙酸乙酯、丙酮、無水乙醇、甲醇、正丁 醇中的一種或多種按任意比例組成的溶劑，所述酸催化劑是甲酸或乙酸 中的一種；

(2)將步驟(1)所得的多球殼菌素內(nèi)酯餾分蒸干，剩余物用溶劑B 結(jié)晶，收集晶體，得多球殼菌素內(nèi)酯單體；其中所述溶劑B是選自乙醇、 甲醇、水中的一種或多種按任意比例組成的溶劑；

(3)取多球殼菌內(nèi)酯單體置于堿和水中形成反應(yīng)體系，多球殼菌素 內(nèi)酯單體在堿性條件下與水完全反應(yīng)，得到多球殼菌素溶液，然后將該 溶液蒸干得剩余物即為分離純化的多球殼菌素單體；其中所述堿是吡啶 或氨水中的一種。