[發明專利]一種檢測桑樹花葉萎縮病病原體的方法有效
| 申請號： | 200910101859.0 | 申請日： | 2009-09-03 |
| 公開（公告）號： | CN101691616A | 公開（公告）日： | 2010-04-07 |
| 發明（設計）人： | 費建明;王文兵;李玉峰;白雪川;施國方 | 申請（專利權）人： | 湖州市農業科學研究院 |
| 主分類號： | C12Q1/70 | 分類號： | C12Q1/70;C12Q1/68;C12R1/94 |
| 代理公司： | 湖州金衛知識產權代理事務所(普通合伙) 33232 | 代理人： | 趙衛康 |
| 地址： | 313000 *** | 國省代碼： | 浙江;33 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 檢測 桑樹 花葉 萎縮 病原體 方法 | ||
1.一種檢測桑樹花葉萎縮病病原體的方法，包括以下步驟：
①從待檢測的桑樹的葉片或芽體剪取樣品，提取總RNA得到提 取溶液；
②在所述提取溶液中加入DNA分解酶，待DNA分解后得到總RNA 溶液；
③取總RNA溶液中的溶液，將RNA進行RNA逆轉錄，合成cDNA；
④對合成的cDNA進行PCR擴增；
⑤取擴增的cDNA，在瓊脂糖下電泳，得到提純的cDNA；
⑥將經過步驟⑤得到的cDNA在紫外燈下觀察是否有擴增的 DNA條帶；
所述步驟④中PCR擴增時使用的引物序列為：引物1：5’-GTC
CAG?ACACAC?ATC?T-3’，引物2：5’-TGA?TGA?GTT?CGA?AAG?AAC-3’。
2.根據權利要求1所述的一種檢測桑樹花葉萎縮病病原體的方 法，其特征在于：所述的將RNA進行RNA逆轉錄是由腺苷酸、尿苷酸、 胸腺嘧啶、尿嘧啶隨機組合的長度為6個核苷酸的隨機引物的混合物 為引物。
3.根據權利要求1所述的一種檢測桑樹花葉萎縮病病原體的方 法，其特征在于：所述PCR擴增條件是先于95℃變性5分鐘然后進 入30個PCR的循環，循環結束后，再在72℃條件下保持10分鐘。
4.根據權利要求4所述的一種檢測桑樹花葉萎縮病病原體的方 法，其特征在于：所述的循環具體為：94℃停留30秒后，于55℃ 停留30秒后，于72℃保持1分鐘。
5.根據權利要求1所述的一種檢測桑樹花葉萎縮病病原體的方 法，其特征在于：步驟⑥所述紫外燈觀察在356bp位置進行。
6.根據權利要求1所述的一種檢測桑樹花葉萎縮病病原體的方 法，其特征在于：步驟①中所述的提取總RNA是以Trizol試劑作為 提取劑提取總RNA。
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