[發(fā)明專利]一種檢測(cè)桑樹(shù)花葉萎縮病病原體的方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 200910101859.0
• 申請(qǐng)日: 2009-09-03
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN101691616A
• 公開(kāi)（公告）日: 2010-04-07
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 費(fèi)建明;王文兵;李玉峰;白雪川;施國(guó)方
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 湖州市農(nóng)業(yè)科學(xué)研究院
• 主分類號(hào): C12Q1/70
• 分類號(hào): C12Q1/70;C12Q1/68;C12R1/94
• 代理公司: 湖州金衛(wèi)知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 33232
• 代理人: 趙衛(wèi)康

1.一種檢測(cè)桑樹(shù)花葉萎縮病病原體的方法，包括以下步驟：

①?gòu)拇龣z測(cè)的桑樹(shù)的葉片或芽體剪取樣品，提取總RNA得到提 取溶液；

②在所述提取溶液中加入DNA分解酶，待DNA分解后得到總RNA 溶液；

③取總RNA溶液中的溶液，將RNA進(jìn)行RNA逆轉(zhuǎn)錄，合成cDNA；

④對(duì)合成的cDNA進(jìn)行PCR擴(kuò)增；

⑤取擴(kuò)增的cDNA，在瓊脂糖下電泳，得到提純的cDNA；

⑥將經(jīng)過(guò)步驟⑤得到的cDNA在紫外燈下觀察是否有擴(kuò)增的 DNA條帶；

所述步驟④中PCR擴(kuò)增時(shí)使用的引物序列為：引物1：5’-GTC

CAG?ACACAC?ATC?T-3’，引物2：5’-TGA?TGA?GTT?CGA?AAG?AAC-3’。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種檢測(cè)桑樹(shù)花葉萎縮病病原體的方 法，其特征在于：所述的將RNA進(jìn)行RNA逆轉(zhuǎn)錄是由腺苷酸、尿苷酸、 胸腺嘧啶、尿嘧啶隨機(jī)組合的長(zhǎng)度為6個(gè)核苷酸的隨機(jī)引物的混合物 為引物。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種檢測(cè)桑樹(shù)花葉萎縮病病原體的方 法，其特征在于：所述PCR擴(kuò)增條件是先于95℃變性5分鐘然后進(jìn) 入30個(gè)PCR的循環(huán)，循環(huán)結(jié)束后，再在72℃條件下保持10分鐘。

4.根據(jù)權(quán)利要求4所述的一種檢測(cè)桑樹(shù)花葉萎縮病病原體的方 法，其特征在于：所述的循環(huán)具體為：94℃停留30秒后，于55℃ 停留30秒后，于72℃保持1分鐘。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種檢測(cè)桑樹(shù)花葉萎縮病病原體的方 法，其特征在于：步驟⑥所述紫外燈觀察在356bp位置進(jìn)行。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種檢測(cè)桑樹(shù)花葉萎縮病病原體的方 法，其特征在于：步驟①中所述的提取總RNA是以Trizol試劑作為 提取劑提取總RNA。