[發明專利]一種全液相依替巴肽(Eptifibatide)的合成方法

無效

• 申請號: 200910101674.X
• 申請日: 2009-08-21
• 公開（公告）號: CN101993475A
• 公開（公告）日: 2011-03-30
• 發明（設計）人: 阮小麗
• 申請（專利權）人: 杭州諾泰制藥技術有限公司
• 主分類號: C07K7/06
• 分類號: C07K7/06;C07K1/06;C07K1/02;A61P9/10;A61P7/02
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1.一種液相合成依替巴肽(Eptifibatide)的方法，包括以下五個主要階段：

(1).本發明采用過渡金屬鹽絡合催化胍基化液相制備Trt-Mpa-Harg(Boc)₂-OH；

(2).為防止消旋，本發明應用DIC/HOCt，DCC/HOAt或HOBt的混合搭配，于液相中，C-＞N方向合成Fmoc-Gly-Asp(OtBu)-Trp(Boc)-Pro-Cys(Acm)-NH₂，

Fmoc-Gly-Asp(OtBu)-Trp(Boc)-Pro-Cys(Trt)-NH₂，

然后將它們與Trt-Mpa-Harg(BOC)₂-OH聚合，于液相中得七肽片斷Trt-Mpa-Harg(BOC)₂-Gly-Asp(OtBu)-Trp(Boc)-Pro-Cys(Acm)-NH₂Trt-Mpa-Harg(BOC)₂-Gly-Asp(OtBu)-Trp(Boc)-Pro-Cys(Trt)-NH₂；

(3).試劑?三氟乙酸/三異丙基硅烷/苯甲醚/茴香硫醚/水95∶2.5∶2.5∶2.5∶2.5去保護基；

(4).用乙醚沉淀出線性七肽Mpa-Harg-Gly-Asp-Trp-Pro-Cys(Acm)-NH₂，Mpa-Harg-Gly-Asp-Trp-Pro-Cys-NH₂；

(5).線性七肽Mpa-Harg-Gly-Asp-Trp-Pro-Cys(Acm)-NH₂，Mpa-Harg-Gly-Asp-Trp-Pro-Cys-NH₂用80-100mM酸性碘/乙醇溶液氧化成環得依替巴肽(Eptifibatide)。

2.根據權利要求1所概括的階段，其特征在于本發明包括以下二十二個具體步驟：

(1).Trt-Mpa-Lys(Fmoc)-OMe的制備。由Trt-Mpa-OH與H-Lys((Fmoc)-OMe偶合得來；

反應體系中：

偶合試劑為DIC/HOCt；溶劑為DMF；反應溫度為0-35℃；

H-Lys((Fmoc)-OMe，Trt-Mpa-OH，偶合試劑的摩爾數均等同；

冰乙醚沉淀出反應產物。

(2).Trt-Mpa-Lys-OMe的制備。由Trt-Mpa-Lys(Fmoc)-OMe去Fmoc保護基而得；反應體系中：去Fmoc試劑為25％六氫吡啶/DCM；反應持續一個小時。

(3).Trt-Mpa-Harg(Boc)₂-OMe的制備。由Trt-Mpa-Lys-OMe與Boc-NH-C(S)-NH-Boc在有機堿存在條件下，金屬鹽絡合?劑催化回流反應而得；

反應體系中：

反應溶劑為DMF；回流反應溫度為40℃；

Boc-NH-C(S)-NH-Boc的摩爾數是Trt-Mpa-Lys-OMe的摩爾數的2倍；

過渡金屬鹽絡合劑?的摩爾數與Boc-NH-C(S)-NH-Boc的摩爾數等同；

過渡金屬鹽絡合劑包括錳鹽，鐵鹽，鈷鹽，鎳鹽，銅鹽，銀鹽，汞鹽，鎘鹽，鋅鹽以及鉛鹽；

有機堿包括吡啶，三乙胺等叔胺；

冰乙醚沉淀出反應產物。

(4).Fmoc-Pro-Cys(Acm)-NH₂的制備。由Fmoc-Pro-OH與H-Cys(Acm)-NH₂聚合而得；

反應體系中：

偶合試劑為DIC與HOCt；反應溶劑為DMF；反應溫度0-35℃；

Fmoc-Pro-OH，H-Cys(Acm)-NH₂，偶合試劑的摩爾數均等同；

冰乙醚沉淀出反應產物。

(5).H-Pro-Cys(Acm)-NH₂的制備。由Fmoc-Pro-Cys(Acm)-NH₂去Fmoc保護基而得；

反應體系中：?

去Fmoc保護基試劑為25％六氫吡啶/DCM；反應持續一個小時。

(6).Fmoc-Trp(Boc)-Pro-Cys(Acm)-NH₂的制備。由H-Pro-Cys(Acm)-NH₂與Fmoc-Trp(Boc)-OH偶合而得；

反應體系中：

偶合試劑為DCC與HOBt；反應溶劑為DMF；反應溫度為0-35℃；

Fmoc-Trp(Boc)-OH，H-Pro-Cys(Acm)-NH₂，偶合試劑的摩爾數均等同；

冰乙醚沉淀出反應產物。

(7).H-Trp(Boc)-Pro-Cys(Acm)-NH₂的制備。由Fmoc-Trp(Boc)-Pro-Cys(Acm)-NH₂去Fmoc保護基而得；

反應體系中：

去Fmoc保護基試劑為25％六氫吡啶/DCM；反應持續一個小時。

(8).Fmoc-Asp(OtBu)-Trp(Boc)-Pro-Cys(Acm)-NH₂的制備。

由H-Trp(Boc)-Pro-Cys(Acm)-NH₂與Fmoc-Asp(OtBu)-OH偶合而得；

反應體系中：

偶合試劑為DCC與HOAt；反應溶劑為DMF；反應溫度為0-35℃；

Fmoc-Asp(OtBu)-OH，H-Trp(Boc)-Pro-Cys(Acm)-NH₂，偶合試劑的摩爾數均等同；

冰乙醚沉淀出反應產物。

(9).H-Asp(OtBu)-Trp(Boc)-Pro-Cys(Acm)-NH₂的制備。

由Fmoc-Asp(OtBu)-Trp(Boc)-Pro-Cys(Acm)-NH₂去Fmoc保護基而得；

反應體系中：

去Fmoc保護基試劑為25％六氫吡啶/DCM；反應持續一個小時。

(10).Fmoc-Gly-Asp(OtBu)-Trp(Boc)-Pro-Cys(Acm)-NH₂的制備。

由H-Asp(OtBu)-Trp(Boc)-Pro-Cys(Acm)-NH₂與Fmoc-Gly-OH聚合而來；

反應體系中：

偶合試劑為DCC與HOAt；反應溶劑為DMF；反應溫度為0-35℃；

Fmoc-Gly-OH，H-Asp(OtBu)-Trp(Boc)-Pro-Cys(Acm)-NH₂，偶合試劑的摩爾數均等同；

冰乙醚沉淀出反應產物。

(11).H-Gly-Asp(OtBu)-Trp(Boc)-Pro-Cys(Acm)-NH₂的制備。

由Fmoc-Gly-Asp(OtBu)-Trp(Boc)-Pro-Cys(Acm)-NH₂去Fmoc保護基而得；

反應體系中：

去Fmoc保護基試劑為25％六氫吡啶/DCM；反應持續一個小時。

(12).Trt-Mpa-Harg(Boc)-Gly-Asp(OtBu)-Trp(Boc)-Pro-Cys(Acm)-NH₂的制備。由H-Gly-Asp(OtBu)-Trp(Boc)-Pro-Cys(Acm)-NH₂與Trt-Mpa-Harg(Boc)₂-OH聚合而來；

反應體系中：

偶合試劑為DIC與HOCt；反應溶劑為DMF；反應溫度為0-35℃；

Trt-Mpa-Harg(Boc)₂-OH，H-Gly-Asp(OtBu)-Trp(Boc)-Pro-Cys(Acm)-NH₂，偶合試劑的摩爾數均等同；

冰乙醚沉淀出反應產物。?

(13).Fmoc-Pro-Cys(Trt)-NH₂的制備。由Fmoc-Pro-OH與H-Cys(Trt)-NH₂聚合而得；

反應體系中：

偶合試劑為DIC與HOCt；反應溶劑為DMF；反應溫度為0-35℃；

Fmoc-Pro-OH的摩爾數，H-Cys(Trt)-NH₂的摩爾數，偶合試劑的摩爾數均等同；

冰乙醚沉淀出反應產物。

(14).H-Pro-Cys(Trt)-NH₂的制備。由Fmoc-Pro-Cys(Trt)-NH₂去Fmoc保護基而得；

反應體系中：去Fmoc保護基試劑為25％六氫吡啶/DCM；反應持續一個小時。

(15).Fmoc-Trp(Boc)-Pro-Cys(Trt)-NH₂的制備。由H-Pro-Cys(Trt)-NH₂與Fmoc-Trp(Boc)-OH偶合而得；

反應體系中：

偶合試劑為DCC與HOBt；反應溶劑為DMF；反應溫度為0-35℃；

Fmoc-Trp(Boc)-OH的摩爾數，H-Pro-Cys(Trt)-NH₂的摩爾數，偶合試劑的摩爾數均等同；

冰乙醚沉淀出產物。

(16).H-Trp(Boc)-Pro-Cys(Trt)-NH₂的制備。

由Fmoc-Trp(Boc)-Pro-Cys(Trt)-NH₂去Fmoc保護基而得；

反應體系中：

去Fmoc保護基試劑為25％六氫吡啶/DCM；反應持續一個小時。

(17).Fmoc-Asp(OtBu)-Trp(Boc)-Pro-Cys(Trt)-NH₂的制備。

由H-Trp(Boc)-Pro-Cys(Trt)-NH₂與Fmoc-Asp(OtBu)-OH聚合而得；

反應體系中：

偶合試劑為DCC與HOAt；溶劑為DMF；反應溫度為0-35℃；

Fmoc-Asp(OtBu)-OH，H-Trp(Boc)-Pro-Cys(Trt)-NH₂，偶合試劑的摩爾數均等同；

冰乙醚沉淀出反應產物。

(18).H-Asp(OtBu)-Trp(Boc)-Pro-Cys(Trt)-NH₂的制備。

由Fmoc-Asp(OtBu)-Trp(Boc)-Pro-Cys(Trt)-NH₂去Fmoc保護基而得；

反應體系中：

去Fmoc保護基試劑為25％六氫吡啶/DCM；反應持續一個小時。

(19).Fmoc-Gly-Asp(OtBu)-Trp(Boc)-Pro-Cys(Trt)-NH₂的制備。

由H-Asp(OtBu)-Trp(Boc)-Pro-Cys(Trt)-NH₂與Fmoc-Gly-OH偶合而得；

反應體系中；

偶合試劑為DCC與HOAt；反應溶劑為DMF；反應溫度為0-35℃；

Fmoc-Gly-OH，H-Asp(OtBu)-Trp(Boc)-Pro-Cys(Trt)-NH₂，偶合試劑的摩爾數均等同；

冰乙醚沉淀出反應產物。

(20).H-Gly-Asp(OtBu)-Trp(Boc)-Pro-Cys(Trt)-NH₂的制備。

由Fmoc-Gly-Asp(OtBu)-Trp(Boc)-Pro-Cys(Trt)-NH₂去Fmoc保護基而得；

去Fmoc保護基試劑為25％六氫吡啶/DCM；反應持續一個小時。

(21).Trt-Mpa-Harg(Boc)2-Gly-Asp(OtBu)-Trp(Boc)-Pro-Cys(Trt)-NH₂的制備。

由H-Gly-Asp(OtBu)-Trp(Boc)-Pro-Cys(Trt)-NH₂與Trt-Mpa-Harg(Boc)₂-OH偶合而得；

反應體系中：?

偶合試劑為DIC與HOCt；反應溶劑為DMF；反應溫度為0-35℃；

Trt-Mpa-Harg(Boc)₂-OH，H-Gly-Asp(OtBu)-Trp(Boc)-Pro-Cys(Trt)-NH₂，偶合試劑摩爾數等同；

冰乙醚沉淀出反應產物。

(22).依替巴肽(Eptifibatide)的制備與純化。

Trt-Mpa-Harg(Boc)₂-Gly-Asp(OtBu)-Trp(Boc)-Pro-Cys(Trt)-NH₂，用試劑三氟醋酸/苯甲醚/茴香硫醚/三異丙基硅烷/水(95∶2.5∶2.5∶2.5∶2.5)去保護基后用乙醚沉淀出Mpa-Harg-Gly-Asp-Trp-Pro-Cys-NH₂；

Trt-Mpa-Harg(Boc)₂-Gly-Asp(OtBu)-Trp(Boc)-Pro-Cys(Acm)-NH₂用試劑三氟醋酸/苯甲醚/茴香硫醚/三異丙基硅烷/水(95∶2.5∶2.5∶2.5∶2.5)去保護基后用乙醚沉淀出Mpa-Harg-Gly-Asp-Trp-Pro-Cys(Acm)-NH₂；將以上所得二線性七肽用80-100mM?I₂的乙醇溶液氧化環化后均得依替巴肽(Eptifibatide)。