[發明專利]從非變性聚丙烯酰胺膠中回收和純化DNA片段的方法有效
| 申請號： | 200910100944.5 | 申請日： | 2009-08-10 |
| 公開（公告）號： | CN101619311A | 公開（公告）日： | 2010-01-06 |
| 發明（設計）人： | 朱玉君;莊杰云;樊葉楊 | 申請（專利權）人： | 中國水稻研究所 |
| 主分類號： | C12N15/10 | 分類號： | C12N15/10;C07H21/04 |
| 代理公司： | 浙江翔隆專利事務所 | 代理人： | 沈綠怡 |
| 地址： | 310006浙*** | 國省代碼： | 浙江;33 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 變性 聚丙烯酰胺 回收 純化 dna 片段 方法 | ||
【權利要求書】：
1.一種從非變性聚丙烯酰胺膠中回收和純化DNA片段的方法，該方法具體 步驟如下：
(1)樣品清洗：從染色顯帶后的非變性PAGE膠中切下目標DNA片段，置于 稱量皿中，加入雙蒸水洗滌；
(2)樣品研磨：將洗滌后的膠條移入無菌離心管，利用組織研磨儀將其充 分打碎；
(3)樣品浸泡：加入分散緩沖液，所述分散緩沖液為：0.5M醋酸銨，0.01M 醋酸鎂，pH8.0的1mM?EDTA，0.1％SDS，混勻，60℃溫浴1小時；
(4)凝膠去除：加入與上述分散緩沖液等體積的氯仿抽提液，離心，吸取 上清液，移入新的無菌離心管中；
(5)乙醇沉淀：加入上述上清液2倍體積的冰乙醇，混勻，靜置10分鐘， 離心，棄上清液，經75％乙醇清洗后，倒置干燥；
(6)DNA溶解：加入1×TE緩沖液，溶解，取微量樣品檢測其質量，其余樣品保 存于-20℃待用。
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