[發明專利]三靶向嵌合型溶瘤腺病毒Ad5/F11載體的構建方法及其應用

無效

• 申請號: 200910099604.5
• 申請日: 2009-06-11
• 公開（公告）號: CN101565718A
• 公開（公告）日: 2009-10-28
• 發明（設計）人: 錢程;劉立;張磊;楊智
• 申請（專利權）人: 浙江理工大學
• 主分類號: C12N15/861
• 分類號: C12N15/861;A61K48/00;A61P35/00
• 代理公司: 杭州求是專利事務所有限公司
• 代理人: 周 烽

1.一種三靶向嵌合型溶瘤腺病毒Ad5/F11載體的構建方法，其特征在于，該方法是以雙靶向溶瘤腺病毒載體pCN103和pCN205做為基礎，通過將5型腺病毒Ad5的骨架與人11型腺病毒Ad11的纖維蛋白fiber進行嵌合并利用端粒酶逆轉錄酶hTERT啟動子來調控缺失了CR2區與Rb蛋白結合所必需的24bp的E1A基因。

2.一種權利要求1所述三靶向嵌合型溶瘤腺病毒Ad5/F11載體的構建方法，其特征在于，該方法具體包括以下步驟：

(1)通過PCR的方法，將人11型腺病毒的Fiber基因裝載于穿梭質粒p11zf-ad5-ad11p。

(2)通過同源重組的方法將人11型病毒Fiber基因替換pCN103骨架質粒中的5型病毒Fiber基因。

(3)用酶切連接的方法構建E3區缺失6.7K和gp19K基因的載體質粒pCN204；

(4)將所有具有殺傷和抑制各類癌癥的外源基因如IL-24、TRAIL、SOCS3、cpp-SOCS3、SOCS1和cpp-SOCS1克隆進pCN204的多克隆位點，構建成質粒pCN204-IL-24。

(5)將質粒pCZ204-IL-24通過酶切和片段回收后，電轉化在BJ5183同源重組，獲得三靶向嵌合型溶瘤腺病毒Ad5/F11載體，命名為pCN205-11p載體。

3.一種權利要求2所述三靶向嵌合型溶瘤腺病毒Ad5/F11載體的構建方法的用途，其特征在于，用該方法獲得載體pCN205-11p構建的三靶向嵌合型溶瘤腺病毒如AdCN205-11-IL-24、AdCN205-11-TRAIL、AdCN205-11-SOCS3、AdCN205-11-cpp-SOCS3，AdCN205-11-SOCS1和AdCN205-11-cpp-SOCS1用于制備治療腫瘤的藥物的用途。