[發(fā)明專利]胰島素樣分泌細(xì)胞的制備法及所用的組合培養(yǎng)基

無效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 200910099429.X
• 申請(qǐng)日: 2009-06-15
• 公開（公告）號(hào): CN101570741A
• 公開（公告）日: 2009-11-04
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 吳育連;謝秋萍
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 浙江大學(xué)
• 主分類號(hào): C12N5/08
• 分類號(hào): C12N5/08
• 代理公司: 杭州中成專利事務(wù)所有限公司
• 代理人: 金 祺

1、一種組合培養(yǎng)基，其特征是：由分別獨(dú)立的培養(yǎng)基I、培養(yǎng)基II和培養(yǎng)基III組成；

培養(yǎng)基I為：DMEM高糖培養(yǎng)基，1-2％胎牛血清，9-11ng/ml堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子，1％二甲基亞砜和17-25mmol/l葡萄糖；

培養(yǎng)基II為：無血清DMEM/F12培養(yǎng)基，15-19mmol/l葡萄糖，9-11mmol/l尼克酰胺，18-22ng/ml表皮生長(zhǎng)因子，18-22ng/ml堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子，10nmol/lexendin-4，1％B27添加劑和1％N2添加劑；

培養(yǎng)基III為：RPMI?1640培養(yǎng)基，10-12mmol/l葡萄糖，9-11mmol/l尼克酰胺，9-11mmol/l4-羥乙基哌嗪乙磺酸，90-110pmol/l肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子，1.5-2.5nmol/l激活素A和9-11nmol/lexendin-4。

2、如權(quán)利要求1所述的組合培養(yǎng)基的用途：將hBM-MSCs轉(zhuǎn)化成胰島素樣分泌細(xì)胞。

3、利用權(quán)利要求1所述的組合培養(yǎng)基進(jìn)行的胰島素樣分泌細(xì)胞制備法，其特征是：采用3-5代hBM-MSCs，包括以下步驟：

1)、以培養(yǎng)基I重懸所述3-5代hBM-MSCs，然后以2-3×10⁴個(gè)細(xì)胞/cm²密度接種于6孔板，于37℃、5％CO₂的環(huán)境，接種時(shí)間為65～80小時(shí)；

2)、將上述接種后所得的細(xì)胞用磷酸緩沖液洗滌，將洗滌后的細(xì)胞放入培養(yǎng)基II中于37℃、5％CO₂環(huán)境下孵育140～160小時(shí)；

3)、去除步驟2)所得物中的培養(yǎng)基II，然后加入培養(yǎng)基III，于37℃、5％CO₂環(huán)境孵育110～130小時(shí)，得胰島素樣分泌細(xì)胞。