[發(fā)明專利]用于生產(chǎn)無抗原豆粕的微生物菌劑及其制備方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 200910096861.3
• 申請日: 2009-03-19
• 公開（公告）號: CN101503669A
• 公開（公告）日: 2009-08-12
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 湯江武;姚曉紅;吳逸飛;王新
• 申請（專利權(quán)）人: 浙江省農(nóng)業(yè)科學(xué)院
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;A23K1/14;C12R1/125;C12R1/865;C12R1/225
• 代理公司: 杭州豐禾專利事務(wù)所有限公司
• 代理人: 沈伾伾

1、用于生產(chǎn)無抗原豆粕的微生物菌劑，其特征在于該菌劑可以以枯草芽孢桿菌(Bacillus?subtilis)菌株WB117，釀酒酵母菌(Saccharomyces?cerevisiae?Meyenex?Hansen)菌株WY238及乳桿菌(Lactobacillus?sp.)菌株L1為菌種，經(jīng)接種培養(yǎng)基、發(fā)酵、培養(yǎng)，分別制備成菌數(shù)在1億cfu/g以上，含水率在8～14％之間的單菌種菌劑，再將三單菌種菌劑按重量1～3:1?～3:1～3比例混配成生產(chǎn)用復(fù)合菌劑而獲得。

2、制備權(quán)利要求1所述用于生產(chǎn)無抗原豆粕微生物菌劑的方法，其特征在于該方法按以下步驟進(jìn)行：

(1)枯草芽孢桿菌菌株WB117菌劑的制備：1)、將斜面保存的枯草芽孢桿菌(Bacillus?subtilis)菌株WB117菌種接種至LB液體培養(yǎng)基中，在30～37℃，轉(zhuǎn)速120～220rpm下進(jìn)行液體搖瓶發(fā)酵培養(yǎng)16～24h后成為液體菌種，備用；2)、將麩皮、膨潤土、礱糠、葡萄糖和K₂HPO₄按重量70-80％：∶5-20％：∶5-20％∶1-5％∶1-3％比例混合后，按料、水重量1∶1比例加水，經(jīng)0.01MPa滅菌30min成固體培養(yǎng)基，備用；3)、將1)液體菌種按1～3％的接種量接入2)的固體培養(yǎng)基內(nèi)拌勻，經(jīng)30-37℃，60-72小時培養(yǎng)成固體母種；4)、將3)固體母種按0.5～2％的接種量接入2)的固體培養(yǎng)基中，控制料溫在28～50℃之間，以通氣曲盤、曲池或固體發(fā)酵罐方式，經(jīng)60-72小時的工廠化培養(yǎng)；5)、出料后在40～50℃下干燥，粉碎，過60目篩，經(jīng)檢測菌數(shù)在1億cfu/g以上，含水率在8～14％之間即成菌株WB117菌劑；

(2)釀酒酵母菌株WY238菌劑的制備：1)、將斜面保存的釀酒酵母菌(Saccharomyces?cerevisiae?Meyen?ex?Hansen)菌株WY238菌種接種至馬鈴薯液體培養(yǎng)基中，在25～30℃，轉(zhuǎn)速120～220rpm下進(jìn)行液體搖瓶發(fā)酵培養(yǎng)16～24h后成為液體菌種，備用；2)、將麩皮、菜餅、礱糠、豆餅粉、葡萄糖和K₂HPO₄按重量75～85％∶5～10％∶3～8％∶2～6％∶0.3-1％∶0.2-0.3％比例混合后，按料、水重量1：1比例加水，經(jīng)0.01MPa滅菌30min后成固體培養(yǎng)基，備用；3)、將1)液體菌種按1～3％的接種量接入2)的固體培養(yǎng)基內(nèi)拌勻，經(jīng)25-30℃，16-24小時培養(yǎng)成固體母種；4)、將3)固體母種按0.5～2％接種量接入2)固體培養(yǎng)基中，控制料溫在28～38℃之間，以通氣曲盤、曲池或固體發(fā)酵罐方式，經(jīng)16-24小時工廠化發(fā)酵培養(yǎng)；5)、出料后在40～50℃下干燥，粉碎，過60目篩，經(jīng)檢測菌數(shù)在1億cfu/g以上，含水率在8～14％之間即成菌株WY238菌劑；

(3)乳酸菌菌株L1菌劑的制備：1)、將保存的乳桿菌(Lactobacillus?sp.)菌株L1菌種接種至麩皮汁液體培養(yǎng)基中，33℃～38℃下，靜置培養(yǎng)16～24小時成液體菌種，備用；2)、將糖蜜10～15％、酵母膏0.5～1％、蛋白胨0.3～0.8％及葡萄糖或蔗糖0.1～0.3％，并以水補(bǔ)足至100％，混合后置液體發(fā)酵罐內(nèi)，經(jīng)0.01MPa滅菌30min成液體培養(yǎng)基，備用；3)、將1)液體菌種按5～10％接種量接入2)液體培養(yǎng)基中，在33～38℃，厭氧條件下發(fā)酵培養(yǎng)18-30小時后，取出；4)、將3)發(fā)酵液與麩皮按體積重量1升：1公斤比例混勻、吸附后，在40～45℃下通風(fēng)、干燥，粉碎，過60目篩，經(jīng)檢測菌數(shù)在1億cfu/g以上，含水率在8～14％之間即成菌株L1菌劑；

(4)復(fù)合菌劑的制備：將步驟(1)、(2)與(3)三種單種菌劑按重量份1～3∶1～3∶1～3比例混合即成復(fù)合菌劑。