[發明專利]大黃魚精子超低溫凍存方法及凍存裝置

無效

• 申請號: 200910096614.3
• 申請日: 2009-03-11
• 公開（公告）號: CN101502256A
• 公開（公告）日: 2009-08-12
• 發明（設計）人: 竺俊全;葉霆;王春琳
• 申請（專利權）人: 寧波大學
• 主分類號: A01N1/02
• 分類號: A01N1/02;F25D3/10
• 代理公司: 寧波奧圣專利代理事務所（普通合伙）
• 代理人: 程曉明

1.大黃魚精子超低溫的凍存裝置，包括帶蓋的泡沫箱，所述泡沫箱內置有液氮， 其特征在于所述泡沫箱內深為18厘米，壁厚為2.5厘米，在所述泡沫箱的兩長壁上對稱 設置有從所述泡沫箱的箱頂向下的凹槽，所述凹槽從所述泡沫箱的箱頂向下的深度為 0.5厘米，所述液氮的液面與所述凹槽的距離為2.5～3.5厘米。

2.利用權利要求1所述的大黃魚精子超低溫的凍存裝置的大黃魚精子超低溫凍存 方法，其特征在于包括下述步驟：

1)抗凍液配制：按體積比85～90∶10～15將稀釋液與抗凍劑混合均勻，配制成抗 凍液置于4℃溫度條件下保存待用；

2)精子采集：挑選性腺發育成熟的雄性大黃魚，擦干其生殖孔周圍體表，輕壓魚 腹獲得精液，置于培養皿或小燒杯中，放于冰浴上；

3)抗凍液與精液的混合液的配制：按體積比1∶2.5～3.5，將上述步驟2的精液與 上述步驟1的抗凍液混合均勻，得到混合液，在4℃溫度條件下平衡10～15分鐘；

4)混合液分裝：將平衡后的0.35～0.45毫升混合液裝于0.5毫升的麥細管中；

5)混合液凍存：將上述步驟4的麥細管擱置于簡易盛有液氮的凍存裝置的凹槽中， 所述凹槽與所述液氮的液面的距離為2.5～3.5厘米，蓋上凍存裝置的蓋保持2.5～3.5分 鐘，然后開蓋將所述麥細管投入所述液氮中，再蓋上凍存裝置的蓋保持4～6分鐘，開 蓋撈出所述麥細管立即轉入液氮罐中保存。

3.如權利要求2所述的大黃魚精子超低溫凍存方法，其特征在于在上述步驟1中， 所述稀釋液與所述抗凍劑的體積比為86.7∶13.3。

4.如權利要求2所述的大黃魚精子超低溫凍存方法，其特征在于所述稀釋液為按 下述配方配制而成：

NaCl：??7.25克??KCl：?????????0.38克??CaCl₂：?????????0.18克

NaHCO₃：1.00克??MgSO₄·7H₂O：?0.23克??NaH₂PO₄·2H₂O：?0.41克

葡萄糖：1.00克，用蒸餾水溶解和定溶至1000毫升。

5.如權利要求2所述的大黃魚精子超低溫凍存方法，其特征在于在上述步驟3中， 所述精液與所述抗凍液的體積比為1∶3。

6.如權利要求2所述的大黃魚精子超低溫凍存方法，其特征在于在上述步驟5中， 所述麥細管與所述液氮的液面的距離為3厘米。