[發明專利]快速診斷人粒細胞無形體病的免疫層析試紙及其制備法

無效

• 申請號: 200910096459.5
• 申請日: 2009-03-09
• 公開（公告）號: CN101498729A
• 公開（公告）日: 2009-08-05
• 發明（設計）人: 張耀洲;鄭青亮;舒建洪
• 申請（專利權）人: 浙江理工大學
• 主分類號: G01N33/577
• 分類號: G01N33/577;G01N33/543;G01N33/569
• 代理公司: 杭州中成專利事務所有限公司
• 代理人: 金 祺

1、一種快速診斷人粒細胞無形體病的免疫層析試紙，其特征是：包括上樣墊(1)、含有金標記的msp2抗體的膠體金墊(2)、包被質控線(6)和檢測線(5)的硝酸纖維素膜(3)以及吸樣墊(4)，在硝酸纖維素膜(3)的上表面分別設置膠體金墊(2)和吸樣墊(4)，所述上樣墊(1)位于膠體金墊(2)的上表面；所述檢測線(5)為包被在硝酸纖維素膜(3)上的msp2多克隆抗體，質控線(6)為包被在硝酸纖維素膜(3)上的羊抗兔IgG抗體。

2、根據權利要求1所述的快速診斷人粒細胞無形體病的免疫層析試紙，其特征是：所述硝酸纖維素膜(3)的下表面與支撐板(7)相連；保護膜(8)覆蓋在上樣墊(1)、膠體金墊(2)、硝酸纖維素膜(3)和吸樣墊(4)之上。

3、根據權利要求1或2所述的快速診斷人粒細胞無形體病的免疫層析試紙，其特征是：在硝酸纖維素膜(3)上表面靠近質控線(6)并遠離檢測線(5)處設置吸樣墊(4)，在硝酸纖維素膜(3)上表面遠離質控線(6)并靠近檢測線(5)處設置膠體金墊(2)。

4、根據權利要求3所述的快速診斷人粒細胞無形體病的免疫層析試紙，其特征是：所述上樣墊(1)為玻璃纖維膜，吸樣墊(4)為吸水濾紙，支撐板(7)為塑料支撐板。

5、如權利要求1～4中任意一種免疫層析試紙的制備方法，其特征是：膠體金墊(2)中金標記的msp2抗體以及作為檢測線(5)包被用的msp2抗體，均為重組表達msp2蛋白后免疫新西蘭大白兔所獲得的多克隆抗體。

6、根據權利要求5所述的免疫層析試紙的制備方法，其特征是：所述包被檢測線(5)和質控線(6)的硝酸纖維素膜(3)的制作方法如下：

用緩沖液將msp2多克隆抗體配制成濃度為0.8～1.2mg/ml的溶液，用噴膜儀在硝酸纖維素膜(3)的下表面以0.8～1.2ul/cm的參數劃線，包被成檢測線(5)；

用緩沖液將羊抗兔IgG抗體配制成0.8～1.2mg/ml的溶液，用噴膜儀在硝酸纖維素膜(3)的上表面以0.8～1.2ul/cm的參數劃線，包被成質控線(6)；

將劃線后的硝酸纖維素膜(3)于20～25℃的溫度和小于30％的濕度的條件下干燥8～10小時而得。

7、根據權利要求6所述的免疫層析試紙的制備方法，其特征是：所述緩沖液為0.01M?pH7.2磷酸鹽緩沖液、0.01M?pH7.2Tris鹽酸緩沖液或0.01M?pH7.2PBS緩沖液。

8、根據權利要求6或7所述的免疫層析試紙的制備方法，其特征是：所述含有金標記的msp2多克隆抗體的膠體金墊(2)的制備方法如下：

將金標記的msp2多克隆抗體溶液采用膠體金稀釋液進行稀釋，得稀釋后溶液；msp2抗體在上述稀釋后溶液中的濃度為0.8～1.2mg/100ml，按每1ml稀釋后溶液鋪22cm²的比例將溶液均勻地鋪在玻璃纖維素膜上；然后于20～25℃的溫度和小于30％的濕度的條件下干燥2～4小時而得。

9、根據權利要求8所述的免疫層析試紙的制備方法，其特征是：膠體金墊(2)的制備方法中所使用的稀釋后溶液采用如下方法制備：在100ml的pH7.0～9.0直徑為30～50nm的膠體金溶液中加入0.8～1.2mg的msp2多克隆抗體，進行標記；標記結束后離心棄上清，用膠體金稀釋液復容至100ml，得稀釋后溶液；

所述膠體金稀釋液為：48～52mM硼酸鹽緩沖液，調節pH8.0，加入與上述硼酸鹽緩沖液的質量體積比分別為0.5％、1％、2％和0.1％的牛血清白蛋白、水解酪蛋白、蔗糖和Tween20。

10、根據權利要求9所述的免疫層析試紙的制備方法，其特征是：在20～25℃溫度和小于30％的濕度條件下，將包被質控線(6)和檢測線(5)的硝酸纖維素膜(3)放置在支撐板(7)中部，在硝酸纖維素膜(3)的上表面靠近檢測線(5)并遠離質控線(6)的一側搭接膠體金墊(2)，膠體金墊(2)長度的1/2～1/4與硝酸纖維素膜(3)的上表面相接觸；在硝酸纖維素膜(3)的上表面的另一側搭接吸樣墊(4)，吸樣墊(4)長度的1/8～1/12與硝酸纖維素膜(3)的上表面相接觸；在膠體金墊(2)的上表面與硝酸纖維素膜(3)不相接觸的一側搭接上樣墊(1)，上樣墊(1)長度的1/8～1/12與膠體金墊(2)的上表面相接觸；在上樣墊(1)、膠體金墊(2)、硝酸纖維素膜(3)和吸樣墊(4)之上覆蓋保護膜(8)。