[發明專利]烏賊胚胎發育及核行為觀察的熒光染色方法無效
| 申請號： | 200910096303.7 | 申請日： | 2009-02-19 |
| 公開（公告）號： | CN101493414A | 公開（公告）日： | 2009-07-29 |
| 發明（設計）人： | 吳常文;遲長鳳;徐佳晶 | 申請（專利權）人： | 浙江海洋學院 |
| 主分類號： | G01N21/64 | 分類號： | G01N21/64 |
| 代理公司： | 寧波奧凱專利事務所 | 代理人： | 白洪長 |
| 地址： | 316000浙*** | 國省代碼： | 浙江;33 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 烏賊 胚胎 發育 行為 觀察 熒光 染色 方法 | ||
1、烏賊胚胎發育及核行為觀察的熒光染色方法，其特征是具有如下步驟：
①選取烏賊卵，剝離外層卵膜并且只保留最內一層卵膜；
②將步驟①處理后的烏賊卵浸沒在固定液中4℃保存，并且保存期間更換所述的固定液2次至4次；
③將經步驟②固定的烏賊卵用緩沖液沖洗2次至3次后，再用熒光染色劑進行染色，并且染色過程在黑暗環境下進行；
④將經步驟③處理后的所述的烏賊卵的動物極小頭切下，平鋪在載玻片上，并在熒光顯微鏡下拍照成像。
2、根據權利要求1所述的烏賊胚胎發育及核行為觀察的熒光染色方法，其特征是：步驟②中所述的固定液按重量分數含有戊二醛2份至4份、多聚甲醛2.5份至5份、過濾海水90份至96份。
3、根據權利要求2所述的烏賊胚胎發育及核行為觀察的熒光染色方法，其特征是：步驟③中的染色劑為4，6-二脒基苯基吲哚，染色時間為30min至50min。
4、根據權利要求2所述的烏賊胚胎發育及核行為觀察的熒光染色方法，其特征是：步驟③中的染色劑為Hoechst33258熒光染料，染色時間為5min至8min。
5、根據權利要求3或4所述的烏賊胚胎發育及核行為觀察的熒光染色方法，其特征是：所述的緩沖液為pH7.4的磷酸緩沖液。
6、根據權利要求5所述的烏賊胚胎發育及核行為觀察的熒光染色方法，其特征是：步驟④中，所述的熒光顯微鏡的觀察波長為360nm至370nm。
7、根據權利要求6所述的烏賊胚胎發育及核行為觀察的熒光染色方法，其特征是：步驟①所述的烏賊卵的長徑為7.5mm至15.0mm、短徑為6.5mm至9.0mm；所述的烏賊卵的內的卵黃長徑為3.0mm至3.6mm、短徑為2.3mm至2.9mm。
8、根據權利要求5所述的烏賊胚胎發育及核行為觀察的熒光染色方法，其特征是：所述的過濾海水中含有磷酸緩沖液，并且所述的磷酸緩沖液在所述的過濾海水中的濃度為0.1mol/L。
9、根據權利要求6所述的烏賊胚胎發育及核行為觀察的熒光染色方法，其特征是：所述的過濾海水中含有1g/m3至100g/m3的EDTA鈉鹽。
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