[發明專利]春蘭雜交種子與細菌共生萌發方法

無效

• 申請號: 200910094814.5
• 申請日: 2009-08-07
• 公開（公告）號: CN101622922A
• 公開（公告）日: 2010-01-13
• 發明（設計）人: 龐惠仙
• 申請（專利權）人: 昆明市林業科學研究所
• 主分類號: A01C1/00
• 分類號: A01C1/00;A01C1/08;A01N63/00;C12N1/20
• 代理公司: 昆明正原專利代理有限責任公司
• 代理人: 陳 左

1.一種春蘭雜交種子與細菌共生萌發方法，所說的細菌是芽孢桿菌Bacillus?sp，縮寫為Bs細菌，其特征在于該方法的具體步驟如下：

a.將人工授粉、果實生長七至九成熟的蒴果從母株剪下，清理干凈枯殘花瓣，蘸洗衣粉水仔細刷洗，自來水下沖洗干凈；超凈工作臺上用酒精棉球擦拭消毒，再浸入0.1％升汞液中消毒15～20分鐘，無菌水洗兩遍，無菌濾紙或紗布擦干蒴果表面水分；

b.在超凈工作臺無菌器皿里切掉蒴果兩頭，沿蒴果脊線切開果殼，掰開取出種子，將種子均勻播種到事先準備好的1/2MS+蔗糖20g/L+AC?1g/L+瓊脂粉8g/L，pH值5.6的固體培養基中；

c.接種Bs細菌用1/2MS+土豆提取液+蔗糖20g/L，pH值5.6的液體培養基進行培養，所述土豆提取液的添加量為每升液體培養基中添加由50g土豆制備得到的提取液，常溫保存90天仍有效，整個接種過程都在超凈工作臺上進行，共生萌發接種分三種情況進行：

c-1：在播種完種子后隨即接種細菌，即用吸管吸取細菌液，分別滴入各培養瓶中，接種量10滴左右；

c-2：無菌播種效果不好，即一年以上無種子萌發，或種子萌發少，萌發不整齊，此時接種細菌，即用吸管吸取細菌液，分別滴入各培養瓶中，接種量10滴左右，只要種子沒有喪失生活力，接種4個月至13個月，種子即開始大量萌發，持續萌發時間4～10個月；

c-3：播種時同時采用無菌萌發和細菌共生萌發，即：部分種子做無菌萌發，部分種子做共生萌發，方法同c-1、c-2；

d.處理接種完畢，置于溫度23±3℃培養室的培養架上，在室內散射光下進行萌發，隨時觀察種子萌發情況，如果培養基水分蒸發，及時添加無菌水，獲得與Bs細菌共生萌發發育成的中間繁殖體即根莖狀。

2.根據柵要求1所述的春蘭雜交種子與細菌共生萌發方法，其特征在于：所說的發育成的中間繁殖體，可以帶菌培養，也可以除菌后無菌培養，進行帶菌培養的培養基，不添加土豆、香蕉提取液和椰乳有機物；無菌培養的除菌方法：先將帶菌根狀莖，用無菌水涮洗2～4遍，去除部分細菌，再根據根狀莖大小，用0.1％升汞藥液浸泡4～8分鐘，其間充分搖晃幾次，最后用無菌水涮洗4～6遍即可。