[發(fā)明專利]從富含多糖多酚及次生代謝物質的植物組織中提取總RNA的方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 200910094704.9
• 申請日: 2009-07-09
• 公開（公告）號: CN101638651A
• 公開（公告）日: 2010-02-03
• 發(fā)明（設計）人: 劉迪秋;王繼磊;李文嫻;葛鋒;陳朝銀;田榮歡
• 申請（專利權）人: 昆明理工大學
• 主分類號: C12N15/10
• 分類號: C12N15/10;C07H21/02
• 代理公司: 昆明正原專利代理有限責任公司
• 代理人: 金耀生

1.一種從富含多糖多酚及次生代謝物質的植物組織中提取總RNA的方法，其特征在于它包括以下步驟：

(1)稱取1-2克植物組織，在預冷的研缽中用液氮研磨成粉，轉入50mL離心管中，迅速加入10-20mL預冷的RNA抽提緩沖液，混勻后置于冰上5分鐘，再加入pH4.5-5.5的3mol?L^-1醋酸鈉1-2mL，上下顛倒混勻；RNA抽提緩沖液組成成分為4mol?L^-1異硫氰酸胍，25mmol?L^-1檸檬酸鈉，0.5％w/v十二烷基肌氨酸鈉，2％w/v可溶性聚乙烯吡咯烷酮，使用前每100mL抽提緩沖液加入0.5mL?β-巰基乙醇；

(2)加入11-22mL的氯仿，劇烈震蕩將兩相混勻，冰上放置10分鐘后于4℃12000g離心10分鐘，取上清液置于新的離心管中；

(3)重復(2)中的氯仿抽提步驟1次；

(4)在上清液中加入10-20mL異丙醇，混勻后置于-20℃30分鐘，接著4℃12000g離心15min獲得RNA沉淀；

(5)用75％的乙醇溶液清洗沉淀2次，置于室溫干燥20分鐘，用DEPC處理過的ddH₂O1-2mL徹底溶解RNA沉淀

(6)在RNA溶液中加入Tris飽和酚1-2mL，劇烈震蕩將兩相混勻，常溫12000g離心10分鐘，取上清液；

(7)在上清液中加入1-2mL氯仿，劇烈震蕩混勻后，常溫12000g離心10分鐘，取上清液；

(8)在上清液中加入pH4.5-5.5的3mol?L^-1醋酸鈉0.1-0.2mL和1-2mL異丙醇，混勻后于-20℃中放置30分鐘，4℃12000g離心15分鐘得到RNA沉淀；

(9)用75％乙醇溶液洗RNA沉淀物2次，室溫干燥20分鐘后，用100-200μL?DEPC處理過的ddH₂O溶解沉淀，獲得純化后的RNA；

2.根據權利1所述的從富含多糖多酚及次生代謝物質的植物組織中提取總RNA的方法，其特征在于植物組織包括紅皮梨和葡萄的幼嫩葉片、果肉、果皮組織以及草莓果實和新疆紫草愈傷組織。

3.根據權利要求1所述的從富含多糖多酚及次生代謝物質的植物組織中提取總RNA的方法，其特征在于所述的75％乙醇是由7.5份無水乙醇和2.5份DEPC處理過的ddH₂O配制，DEPC處理過的ddH₂O是由0.1份DEPC加入99.9份ddH₂O中渦旋混勻再經高溫高壓滅菌的純?水。

4.根據權利要求1所述的從富含多糖多酚及次生代謝物質的植物組織中提取總RNA的方法，其特征在于所述的Tris飽和酚溶液其pH值為7.8-8.0，含8-羥基喹啉和巰基乙醇。?